TAILIEUCHUNG - CƠ SỞ DI TRUYỀN CHỌN GIỐNG THỰC VẬT part 10

Có thể khuếch đại một đoạn rất dài (cho đến 40 kb) nhưng người ta phải sử dụng phương pháp đặc biệt hơn. - Kích thước của primer Đoạn mồi nên dài bao nhiêu? Nếu đoạn mồi ngắn quá thi nó sẽ gắn vào những vị trí không mong muốn, nhu vậy những đoạn không mong muốn được khuếch đại lên. Chẳng hạn, DNA tổng số của người được sử dụng với hai mồi có độ dài 8 nucleotide. | 203 thường người ta có thể khuếch đại những đoạn có độ lớn cho đến 10 kb nhưng khi độ dài càng lớn thì hiệu quả phản ứng càng thấp và càng khó khăn hơn để thu được kết quả. Có thể khuếch đại một đoạn rất dài cho đến 40 kb nhưng người ta phải sử dụng phương pháp đặc biệt hơn. - Kích thước của primer Đoạn mồi nên dài bao nhiêu Nếu đoạn mồi ngắn quá thi nó sẽ gắn vào những vị trí không mong muốn nhu vậy những đoạn không mong muốn được khuếch đại lên. Chẳng hạn DNA tổng số của người được sử dụng với hai mồi có độ dài 8 nucleotide. Kết quả được chỉ ra ở hình . Nhiều đoạn khác nhau được khuếch đại vì người ta tính toán trung bình cứ 65 536 bp 84 có một ví trí gắn cho mồi. Tổng số có khoảng 46 000 vị trí trong hệ gen người có 3 000 000 kb. Vì vậy rất khó tin là một cặp mồi tạo nên một sản phẩm PCR đồng nhất với khuôn mẫu là DNA người. Hình Nhiệt độ có tác dụng quan trọng lên phản ứng lai giữa primer và DNA khuôn Khi sử dụng mồi có 17 nucleotide với trình tự này thì cứ 17 179 869 184 bp có 1 vị trí gắn 417 . Số này lớn hơn 5 lần base trong tổng số hệ gen người vì vậy người ta chờ đợi nhiều nhất là có một vị trí gắn. Với một cặp mồi có độ dài 17 nucleotide thì có thể một sản phẩm khuếch đại duy nhất xuất hiện Hình . 204 Độ dài của mồi ảnh hưởng đến sự gắn với DNA khuôn nhanh hay chậm ở mồi dài thì quá trình này chậm hơn. Hiệu quả của phản ứng PCR là số lượng bản sao được tạo ra trong một thí nghiệm sẽ giảm khi mồi dài vì với thời gian cho phép trong chu kỳ phản ứng không xảy ra phản ứng lai đầy đủ. Trong thực tế không có mồi nào dài hơn 30 nucleotide được sử dụng. Quan trọng nhất là nhiệt độ gắn vì nó ảnh hưởng đến tính đặc hiệu của phản ứng. Nếu nhiệt độ cao quá không xảy ra sự gắn kết mồi và khuô n đứng riêng lẽ Hình . Nếu nhiệt độ quá thấp những thể lai không đặc hiệu bền vững trong đó không phải tất cả các cặp base bắt cặp chính xác Hình . Trong trường hợp này những chú ý về độ dài của mồi không có ý nghĩa vì từ đó chỉ xuất hiện những thể lai .

TAILIEUCHUNG - Chia sẻ tài liệu không giới hạn
Địa chỉ : 444 Hoang Hoa Tham, Hanoi, Viet Nam
Website : tailieuchung.com
Email : tailieuchung20@gmail.com
Tailieuchung.com là thư viện tài liệu trực tuyến, nơi chia sẽ trao đổi hàng triệu tài liệu như luận văn đồ án, sách, giáo trình, đề thi.
Chúng tôi không chịu trách nhiệm liên quan đến các vấn đề bản quyền nội dung tài liệu được thành viên tự nguyện đăng tải lên, nếu phát hiện thấy tài liệu xấu hoặc tài liệu có bản quyền xin hãy email cho chúng tôi.
Đã phát hiện trình chặn quảng cáo AdBlock
Trang web này phụ thuộc vào doanh thu từ số lần hiển thị quảng cáo để tồn tại. Vui lòng tắt trình chặn quảng cáo của bạn hoặc tạm dừng tính năng chặn quảng cáo cho trang web này.