TAILIEUCHUNG - Giáo trình DNA tái tổ hợp part 10

Sàng lọc các khuẩn lạc sản xuất protein dung hợp. Phương pháp sàng lọc khuẩn lạc để phát hiện protein dung hợp được tiến hành như sau: Nuôi cấy qua đêm ở 37oC (một lượng nhỏ) từ 5-10 khuẩn lạc trong môi trường LB có chứa ampicillin. Sau đó, cảm ứng nuôi cấy bằng cách bổ sung thêm isopropylthio-β-galactoside (IPTG) cho vector pUR và tiếp tục nuôi ở 37 oC, đối với vector pEX thì chuyển nuôi cấy 37oC lên nhiệt độ 40oC và tiếp tục nuôi cấy (có sục khí) | sau đó cắt bằng enzyme hạn chế thích hợp và điện di kiểm tra trên agarose gel. Sàng lọc các khuẩn lạc sản xuất protein dung hợp. Phương pháp sàng lọc khuẩn lạc để phát hiện protein dung hợp được tiến hành như sau Nuôi cấy qua đêm ở 37oC một lượng nhỏ từ 5-10 khuẩn lạc trong môi trường LB có chứa ampicillin. Sau đó cảm ứng nuôi cấy bằng cách bổ sung thêm isopropylthio-P-galactoside IPTG cho vector pUR và tiếp tục nuôi ở 37 oC đối với vector pEX thì chuyển nuôi cấy 37oC lên nhiệt độ 40oC và tiếp tục nuôi cấy có sục khí . Sau các khoảng thời gian nuôi cấy khác nhau 1 2 3 và 4 giờ. lấy 1 mL dịch nuôi cấy ly tâm nhanh để thu tiểu thể tái huyền phù chúng trong đệm 1x SDS biến tính ở 100oC trong 3 phút ly tâm g trong 1 phút ở nhiệt độ phòng. Tiến hành điện di SDS trên polyacrylamide gel 6 . Dùng dịch huyền phù tế bào chỉ mang một mình vector làm đối chứng. Protein dung hợp sẽ xuất hiện như là một băng mới dịch chuyển chậm hơn băng P-galactosidase trong đối chứng. 4. Tách chiết các protein dung hợp để sản xuất kháng thể Protein dung hợp có thể được tách chiết theo một số cách dùng dịch chiết urea sắc ký ái lực aminophenylthiogalactoside điện di SDS-polyacrylamide gel hoặc phối hợp giữa các cách này. Phương pháp đơn giản nhất là điện di SDS-PAGE sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis như trình trình bày ở mục 3 nuôi cấy một lượng lớn trong 200 mL . Nhuộm gel và phát hiện băng protein mới sau đó cắt băng này ra khỏi gel đông khô khoảng 2 ngày rồi nghiền thành bột mịn. Bột này sẽ được dùng tiêm vào thỏ để sản xuất kháng thể. II. Sản xuất các protein nguyên thể Các protein nguyên thể có thể được sản xuất trong E. coli bằng cách sử dụng promoter điều hòa mạnh và một trình tự liên kết ribosome hiệu quả. Để biểu hiện gen prokaryote có trình tự liên kết ribosome mạnh chỉ cần cung cấp một promoter là đủ. Trong khi đó để biểu hiện một gen eukaryote hoặc một gen prokaryote với một trình tự liên kết ribosome yếu cần phải cung cấp cả promoter lẫn trình tự liên

• Sinh học
• Giáo trình DNA
• tài liệu DNA
• bài giảng DNA
• công nghệ sinh học
• tài liệu sinh học
• DNA tái tổ hợp
• Giáo trình sinh học
• Công nghệ DNA tái tổ hợp
• hệ thống vector
• Kỹ thuật tạo dòng gen
• Kỹ thuật tái tổ hợp DNA
• Biến nạp bằng điện
• Biểu hiện của gen
• Chu trình sinh tan
• công nghệ DNA
• kỹ thuật di truyền
• kỹ thuật gen
• ứng dụng sinh học
• Giáo trình Sinh học phân tử
• Sinh học phân tử
• Phương pháp định lượng acid nucleic
• Tái tổ hợp DNA
• Điều chế DNA tế bào động vật
• Kỹ thuật phân tích xác nhận phân tử
• Phương pháp vân tay DNA
• sổ tay sinh học
• giáo trình
• tái tổ hợp
• liệu pháp gen
• thuật ngữ sinh học
• Giáo trình Công nghệ DNA tái tổ hợp
• Cân bằng nội môi
• Đối tượng sinh học
• Cấu trúc của sự sống
• Sinh lý học
• Sinh học tiến hoá
• Giáo trình Y học
• Sản xuất protein trong Y học
• Cấu trúc DNA
• Chức năng DNA
• Phân tích gen
• Kỹ thuật phân tích gen
• Vi sinh vật học thú y
• Giáo trình Vi sinh vật học thú y
• Vius học thú y
• Virus DNA một sợi
• Virus DNA hai sợi không có áo
• Virus RNA một sợi âm