TAILIEUCHUNG - Antibody Phage Display Methods and Protocols - part 10

Các globulin miễn dịch G phân tử được cấu tạo từ các dimers chuỗi nặng và không có các chuỗi ánh sáng. Hơn nữa, các phân tử này thiếu miền CH1. Biểu hiện của các lĩnh vực liên kết (VHH) của những Abs chuỗi nặng trong S. cerevisiae kết quả trong việc tiết hiệu quả của phân tử này và mức sản xuất 250 mg / L | 360 van der Vaart These immunoglobulin G molecules are composed of heavy-chain dimers and are devoid of light chains. Furthermore these molecules lack the CH1 domain. Expression of the binding domain VHH of these heavy chain Abs in S. cerevisiae resulted in the efficient secretion of this molecule and production levels of 250 mg L were obtained in shake-flask experiments 4 . We have shown that the level of VHH expression is dramatically higher than that seen when the same Ab fragment is expressed in Escherichia coli Fig. 1 . This chapter describes protocols for the expression of heavy chain Ab fragments VHH in S. cerevisiae using an episomal yeast expression plasmid pUR4548 under control of the GAL7 promoter. The recombinant plasmid is transformed into yeast by lithium acetate transformation or electroporation and the expressed Ab fragments are extracted from the yeast growth medium. More detailed information on yeast expression systems can be found in Romanos et al. 5 . 2. Materials 1. Yeast strain for expression. A typical yeast strain used in this laboratory is SU51 can1 his4 519 leu2 3 112 cir 6 . This strain grows in the presence of histidine leucine and a proper carbon source see Subheading . for selective minimal medium and Subheading . for rich nonselective medium for this strain . 2. Plasmid vector suitable for Ab expression in yeast. The plasmid used in the laboratory pUR4548 4 contains the LEU2 selection marker the SUC2 signal sequence for protein secretion and the galactose-inducible GAL7 promoter see Notes 1-2 . 3. Distilled H2O used for the preparation of buffers and growth media should be double-autoclaved. Used glassware should be free of any contaminants an overnight incubation with 100 mM HCl followed by washing and autoclaving is sufficient . 4. SD broth 10X stock solution g yeast nitrogen base without amino acids dissolved in 100 mL H2O filter-sterilize through a um filter. 5. 20 Glucose 10X stock solution sterilized by .

• Y học thường thức
• giáo trình y học
• tài liệu y học
• phương pháp sinh học phân tử
• thuốc kháng sinh
• tế bào ung thư
• Giáo trình Kinh tế y tế
• Kinh tế y tế
• Y tế công cộng
• Y học dự phòng
• Quản lý tài chính y tế
• Tài chính y tế
• Lập kế hoạch tài chính y tế
• y học dân tộc
• y học phổ thông
• bệnh thường gặp
• y học thực hành
• kiến thức y học
• chuyên ngành y khoa
• tài liệu y khoa
• lý thuyết y học
• bài giảng y học
• bệnh lâm sàng
• chuẩn đoán bệnh
• chuyên ngành y học
• dịch tễ học y học
• giáo trình dịch tễ học y học
• bài giảng dịch tễ học y học
• đề cương dịch tễ học y học
• tài liệ dịch tễ học y học
• nghiên cứu y học
• y học cổ truyền
• Sách y học cổ truyền Việt Nam
• sách kinh điển
• Dược Học
• Huyệt đạo
• Bệnh học thực hành
• Dược vị
• giáo dục y học
• Giáo trình
• Giáo án
• ngành y học