TAILIEUCHUNG - Antibody Phage Display Methods and Protocols - part 6

Chuyển một số chia hết một số clone Ab-thể thực khuẩn eluted vừa 2YT có chứa các kháng sinh thích hợp và mở rộng theo giao thức chuẩn. Cô lập các thể thực khuẩn khuếch đại cho thủ tục lựa chọn thêm hoặc Fab hòa tan cho đặc tính đặc trưng của Ag. | 192 Watkins 3. Transfer an aliquot of the eluted Ab-phage clone to 2YT medium containing the appropriate antibiotics and amplify according to standard protocols. Isolate the amplified phage for further selection procedures or soluble Fab for further characterization of Ag specificity. 4. Notes 1. Polyclonal anti-Ig Ab is one of the most efficient and broadly applicable capture reagents identified to date presumably because of the variability between different clones in the Ab library. Unlabeled polyclonal goat anti-human K Ab mouse-adsorbed Southern Biotechnology Associates is a general capture reagent that has been used successfully on multiple occasions for libraries of human Abs expressing a K light chain. Monoclonal Abs to affinity tags may also be used when appropriate. 2. Labeling of the Ag with biotin permits the rapid subsequent detection of complexes using streptavidin enzyme conjugates. Commercially available biotin labeling reagents with a wide range of reactive chemistries should be tested to identify an Ag-labeling protocol that does not disrupt the epitope s of interest and or interfere with binding. In these instances a biotinylated second Ab that reacts with a distinct epitope on the Ag can be used for detection. 3. The selection of dilution buffer is predominantly Ag-dependent and should be determined experimentally. Inclusion of nonionic detergents is generally useful for reducing background in the assay regardless of the properties of the Ag. For example for the discovery of Abs to cell surface Ags some of which are integral membrane proteins we have used a diluent consisting of PBS-1 BSA 1 Triton X-100 and sodium dodecyl sulfate containing Na azide 3 . 4. The filter is floated on the capture solution in order to minimize the quantity of capture reagent used. 5. The blocking of excess nonspecific protein-binding sites on nitrocellulose is typically accomplished by incubating the filter in a buffered solution of unrelated protein such as

• Y học thường thức
• giáo trình y học
• tài liệu y học
• phương pháp sinh học phân tử
• thuốc kháng sinh
• tế bào ung thư
• Giáo trình Kinh tế y tế
• Kinh tế y tế
• Y tế công cộng
• Y học dự phòng
• Quản lý tài chính y tế
• Tài chính y tế
• Lập kế hoạch tài chính y tế
• y học dân tộc
• y học phổ thông
• bệnh thường gặp
• y học thực hành
• kiến thức y học
• chuyên ngành y khoa
• tài liệu y khoa
• lý thuyết y học
• bài giảng y học
• bệnh lâm sàng
• chuẩn đoán bệnh
• chuyên ngành y học
• dịch tễ học y học
• giáo trình dịch tễ học y học
• bài giảng dịch tễ học y học
• đề cương dịch tễ học y học
• tài liệ dịch tễ học y học
• nghiên cứu y học
• y học cổ truyền
• Sách y học cổ truyền Việt Nam
• sách kinh điển
• Dược Học
• Huyệt đạo
• Bệnh học thực hành
• Dược vị
• giáo dục y học
• Giáo trình
• Giáo án
• ngành y học