TAILIEUCHUNG - Bài 2 - KỸ THUẬT PCR (Polymerase Chain Reaction)

Phương pháp PCR là phương pháp khuếch đại nhanh nhiều bản sao của các đoạn DNA mà không cần phải qua tạo dòng. Phương pháp này được đưa ra năm 1985 và Saiki hoàn thiện năm 1988. PCR là phản ứng nhân bản trình tự DNA quan tâm trong ống nghiệm. Phương pháp này được thực hiện in-vitro với sự hiện diện của enzyme DNA-polymerase. Sự khuếch đại được thực hiện nhờ các chu trình nhiệt được lặp lại. . | BAỉI 2 KỸ THUẬT PCR (Polymerase Chain Reaction) Phương phỏp PCR là phương phỏp khuếch đại nhanh nhiều bản sao của cỏc đoạn DNA mà khụng cần phải qua tạo dũng. Phương phỏp này được đưa ra năm 1985 và Saiki hoàn thiện năm 1988. I. NGUYấN TẮC CỦA PHƯƠNG PHÁP PCR là phản ứng nhõn bản trỡnh tự DNA quan tõm trong ống nghiệm. Phương phỏp này được thực hiện in-vitro với sự hiện diện của enzyme DNA-polymerase. Sự khuếch đại được thực hiện nhờ cỏc chu trỡnh nhiệt được lặp lại. P C R II. CÁC THÀNH PHẦN CẦN THIẾT ĐỂ THỰC HIỆN PHẢN ỨNG Sợi khuôn (DNA hoặc cDNA) Các mồi (Oligonucleotide primers) DNA polymerase chịu nhiệt (Taq) dNTP’s Dung dịch đệm Ion Mg++ III. TIẾN HÀNH PHẢN ỨNG 1. Biến tính ADN: 94-95oC, 30-60 giây. 2. Bắt cặp của mồi vào sợi khuôn: 45-60oC, 30-60 giây. 3. Phản ứng kéo dài chuỗi: 72oC, 60 giây/1kb. 3 bước trên hình thành 1 chu kỳ. Phản ứng PCR được tiến hành trong khoảng 25-40 chu kỳ. Trong kỹ thuật PCR thông thường người ta thực hiện bước biến tính ADN trước khi bước vào chu kỳ. Bước này thường được thực hiện ở 94-95oC, 2-3 phút. Phản ứng PCR - bước bắt cặp của các mồi vào sợi khuôn 5’ 3’ 5’ 3’ 45 - 60ºC 5’ 3’ 3’ 5’ Phản ứng PCR - bước kéo dài chuỗi 72ºC 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 5’ Phản ứng PCR - sản phẩm được hình thành sau 3 bước 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ Bắt cặp & kéo dài chuỗi Biến tính Sản phẩm cuối cùng của phản ứng PCR IV. LỢI ÍCH CỦA PHẢN ỨNG PCR Thời gian thực hiện rất nhanh. Chỉ cần khoảng 3 giờ để khuếch đại trỡnh tự DNA trong khi với phương phỏp tạo dũng ta mất khoảng 1 tuần; Đơn giản và ớt tốn kộm; Độ tinh sạch của mẫu khụng cần cao; V. CÁC ỨNG DỤNG CỦA KỸ THUẬT PCR 1. Nhõn phõn tử RNA bằng kỹ thuật PCR Cần cú cỏc đoạn mồi kết hợp được với khuụn RNA, sau đú tổng hợp cỏc phõn tử DNA nhờ enzyme reverse trancriptase theo kỹ thuật PCR. Enzyme Tth DNA-polymerase cú thể thực hiện cả phản ứng sao chộp ngược và phản ứng tăng số lượng. Quỏ trỡnh này cần cú ion mangan. 2. Kỹ thuật RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) Kỹ thuật RAPD được thực hiện theo cỏc bước sau: Tỏch chiết DNA tổng số, nhõn DNA bằng mỏy PCR; Điện di trờn gel; Xỏc định tớnh đa dạng di truyền bằng cỏc phần mềm thụng dụng. Cỏc số liệu thu được cho thấy sự gần gũi hoặc cỏch biệt di truyền của cỏc mẫu nghiờn cứu. VI. CÁC HẠN CHẾ CỦA PHƯƠNG PHÁP PCR 1. Kớch thước của trỡnh tự cần khuếch đại Trừ vài trường hợp rất cỏ biệt, phương phỏp PCR khụng hoạt động được với những đoạn DNA lớn hơn 3kb. Việc sử dụng PCR đối với cỏc độ dài dưới 1,5 kb cho kết quả tốt. 2. Sự ngoại nhiễm. 3. Cỏc sai sút gõy ra do Taq polymerase. Sự sao chộp bởi Taq polymerase cho tỷ lệ sai khỏ cao (10-4)

• Sinh học
• kỹ thuật PCR
• Polymerase Chain Reaction
• DNA
• phương pháp khuếch đại đoạn DNA
• nghiên cứu sinh học
• sinh học
• bài giảng sinh học
• Kinh nghiệm xây dựng PCR/realtime PCR
• Phát triển PCR/realtime PCR
• Kỹ thuật sinh học phân tử
• Tác nhân vi sinh
• Phương tiện vi sinh
• Áp dụng PCR
• Real time PCR
• Real time PCR phòng thí nghiệm chẩn đoán
• Phòng thí nghiệm chẩn đoán
• PCR phòng thí nghiệm chẩn đoán
• Phát triển kỹ thuật PCR
• Xây dựng kỹ thuật PCR
• Các kỹ thuật sinh học phân tử
• Sinh học phân tử hiện đại
• Chẩn đoán bệnh nhiễm trùng
• ứng dụng PCR
• tài liệu về PCR
• nguyên lý PCR
• phản ứng PCR
• Phát hiện RSV ở bệnh nhi dưới 5 tuổi
• Phát hiện RSV
• Kỹ thuật realtime RT PCR
• Kỹ thuật RT PCR truyền thống
• Hô hấp do RSV
• Tạo chí y học
• Nghiên cứu y học
• Kỹ thuật real time PCR
• Kỹ thuật nested PCR
• Chẩn đoán loài plasmodium spp
• Phát triển kỹ thuật multiplex PCR
• Kỹ thuật multiplex PCR
• Gen chlamydia trachomatis
• Giải mã trình tự gen
• Quy trình multiplex PCR
• Tính chuyên biệt các cặp mồi trong phản ứng multiplex PCR
• Nồng độ primer cho phản ứng multiplex PCR phát hiện DNA
• Phương pháp phát hiện thịt heo trong thực phẩm
• Phương pháp phát hiện thịt bò
• Virut gây bệnh dịch tả vịt
• Đàn vịt sinh sản
• Kỹ thuật RT PCR
• Virut dịch tả vịt
• Virut DTV gây bệnh dịch tả vịt
• Tạp chí khoa học
• Tạp chí y dược
• Y dược quân sự
• Phòng chống não mô cầu
• Neisseria meningitidis
• Nhóm huyết thanh
• Tinh sạch ADN của N
• meningitidis
• Gen CtrA mã hóa
• Phân biệt thịt bò
• Kỹ thuật multiplex real time PCR
• Phân biệt thịt trâu
• Phân biệt thịt heo
• Quy trình multiplex real time PCR
• Multiplex real time PCR nhận diện DNA
• Kỹ thuật chẩn đoán
• PCR chẩn đoán
• PCR Real time
• Phòng thí nghiệm nghiên cứu
• Thiết lập kỹ thuật Taqman probe real time PCR
• Bệnh thận do B polyomavirus
• Định lượng nồng độ BKV ADN
• Taqman probe real time PCR
• Thành phần tối ưu của kỹ thuật real time PCR
• Sử dụng kỹ thuật Rapd Pcr
• Mối quan hệ di truyền
• Một số loài thuộc chi Calothrix Cyanobacteria
• Kỹ thuật Rapd Pcr
• Phản ứng RAPD PCR
• Luận văn Thạc sĩ Sinh học ứng dụng
• Công nghệ sinh học
• Quy trình phát hiện Microsporidia
• Viêm loét giác mạc
• Kỹ thuật Realtime PCR
• sản phẩm PCR
• xác định kiểu gen của HCV
• thử nghiệm RT real time PCR
• đặc hiệu vùng 5’ NC
• phương pháp nghiên cứu
• Virus viêm gan B
• Phương pháp PCR lồng
• Phương pháp tách chiết Hepatitis B virus DNA
• Phân biệt thịt bò trâu heo
• Kỹ thuật Multiplex Realtime PCR
• Quy trình multiplex realtime PCR nhận diện DNA
• Gian lận thương mại
• Quy trình multiplex realtime PCR
• Giá trị của kỹ thuật RT PCR
• Chẩn đoán virut Dengue
• Bệnh viện Quân y 103 năm 2017
• Ứng dụng kỹ thuật Real time PCR
• Xác định kiểu gen
• Bệnh viện đa khoa Đồng Tháp
• Ứng dụng kỹ thuật Realtime PCR
• Đột biến 455G A trên gen Fibrinogen Beta
• Bệnh nhân nhồi máu cơ tim trẻ tuổi
• Nhồi máu cơ tim trẻ tuổi
• Ứng dụng kỹ thuật PCR RFLP
• Kỹ thuật PCR RFLP
• Xác định các đột biến A2142G
• Gene 23s rRNA
• Đề kháng clarithromycin
• Vi khuẩn Helicobacter pylori
• Tạp chí nghiên cứu y học
• Phát triển kỹ thuật multiplex real time PCR
• Taqman probe cải tiến
• Phát hiện HPV nguy cơ thấp
• Độ nhạy cao
• Hiệu quả của kỹ thuật PCR
• Chẩn đoán lao phổi
• Điều trị bệnh lao
• Vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis
• Bệnh viện Lao và Bệnh phổi Thái Nguyên