TAILIEUCHUNG - PCR lý thuyết

Kary Mullis mô tả 1983 (Cetus Corporation) 1985: Xuất hiện trên tạp chí “Science” Đạt Nobel Prize hóa học 1993 Polymerase Chain Reaction (PCR) là phản ứng khuếch đại một đoạn ADN bằng enzym polymerase, thực hiện trong ống nghiệm, có độ nhạy rất cao. | TS. BS Đỗ Thị Thanh Thủy PCR (POLYMERASE CHAIN REACTION) NGUYÊN TẮC VÀ ỨNG DỤNG MỤC TIÊU BÀI GIẢNG Trình bày được nguyên tắc PCR Trình bày được cách chống ngoại nhiễm trong PCR Trình bày được ứng dụng của PCR Kary Mullis mô tả 1983 (Cetus Corporation) 1985: Xuất hiện trên tạp chí “Science” Đạt Nobel Prize hóa học 1993 Polymerase Chain Reaction (PCR) là phản ứng khuếch đại một đoạn ADN bằng enzym polymerase, thực hiện trong ống nghiệm, có độ nhạy rất cao. PCR POLYMERASE CHAIN REACTION PCR POLYMERASE CHAIN REACTION PCR NGUYÊN TẮC PHẢN ỨNG 35-40 chu kì nhiệt Amplicon Số copies = n: Số cycle y: số copies ban đầu 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 1 2 3 4 5 6 Denaturation Annealing Extension Temperature (° C) Time (minutes) Lập lại ≥ 30 lần (chu kỳ) Biến tính 92-96oC Bắt cặp 45-55oC Kéo dài 72oC PCR POLYMERASE CHAIN REACTION GĐ BIẾN TÍNH (92-96oC) DNA đích 95oC 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ GĐ BẮT CẶP (45-55oC) ~55oC 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 5’ A B Primers A B GĐ KÉO DÀI (72oC) 72oC 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 5’ Taq polymerase 72oC 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 5’ Cycle 1 MỘT CHU KỲ NHIỆT Giai đoạn biến tính (92-96oC) Giai đoạn bắt cặp (45-55oC) Giai đoạn kéo dài (72oC) PCR POLYMERASE CHAIN REACTION ĐỘNG HỌC CỦA PCR THÀNH PHẦN TRONG PCR DNA đích 5’ 3’ 3’ 5’ primers A B Nucleotide tự do Taq DNA polymerase Mg2+ Mg2+ Mg2+ Mg2+ Mg2+ Mg2+ Dd đệm chứa magnesium NGUYÊN LIỆU CHO PHẢN ỨNG PCR DNA đích (đoạn DNA quan tâm) Từ máu, chất tiết (đàm, dịch màng phổi, dịch khớp , tóc, phết niêm mạc má, phết cổ tử cung ), [C] 1 µg (0,1-1 µg) Đoạn DNA 1kb đến 10kb (thường <1 kb) 2. Mồi (primers) đoạn đơn DNA thường có 18-22 nucleotide, bổ xung với đoạn DNA đích. 5’-ACT TTC ACC AGC GTT TCT GG-3’ Mồi xuôi, mồi ngược (F, R). Tm (Melting Temperature): 52-58 °C Tm= 4 x (số C + số G) + 2 x (số A + số T)°C %GC: 40% đến 60% Ta: Tm - 5 °C [C]: PCR MIX 5’-ATTCCGATCGCTAATCGATGGC------- TCCTGTGCA TTTCGCCACTAGAG-3’ 3’-TAAGGCTAGCGATTAGCTACCG------- AGGACACGTAAAGCGGTGATCTC-5’ 5’-ATTCCGATCGCTAATCGATG-3’ .

• Y học thường thức
• PCR lý thuyết
• bệnh học đại cương
• giải phẩu học
• phác đồ điều trị
• y cơ sở
• ngoại cơ sở
• dự án nuôi trồng thủy sản
• kỹ thuật nuôi tôm
• tập huấn PCR
• chuẩn đoán bệnh tôm cá
• lý thuyết phòng thí nghiệm
• an toàn phòng thí nghiệm
• phản ứng PCR
• lý thuyết sinh học
• toán di truyền
• đề thi học sinh giỏi sinh
• giáo trình di truyền học
• chuyên ngành y khoa
• tài liệu y khoa
• lý thuyết y học
• giáo trình y học
• bài giảng y học
• bệnh lâm sàng
• chuẩn đoán bệnh
• tài liệu ngành y
• kiến thức y học
• lý thuyết y khoa
• bệnh thường gặp
• chuyên ngành y học
• nghiên cứu y học
• vi sinh vật
• tài liệu vi sinh vật
• nghiên cứu vi sinh vật
• lý thuyết về vi sinh vật
• chuyên ngành vi sinh vật