TAILIEUCHUNG - Các bước cơ bản của phương pháp tách dòng

Quá trình thực hiện có thể thay đổi phụ thuộc vào nhân tố tham gia và mục đích của quá trình tách dòng. Tuy nhiên để tạo dòng, cần phải thực hiện các bước sau: 1. Tách lập các DNA lạ cần tạo dòng Chọn và cắt DNA lạ của tế bào cho bằng một enzyme cắt hạn chế (RE). Phân lập đoạn DNA (gen quí) phù hợp với vector và mục đích cần tạo dòng. Trong trường hợp đặc biệt, để tạo dòng một gen chưa biết, người nghiên cứu có thể tổng hợp hóa học đoạn DNA cần tạo. | Các bước cơ bản của phương pháp tách dòng Quá trình thực hiện có thể thay đổi phụ thuộc vào nhân tố tham gia và mục đích của quá trình tách dòng. Tuy nhiên để tạo dòng cần phải thực hiện các bước sau 1. Tách lập các DNA lạ cần tạo dòng Chọn và cắt DNA lạ của tế bào cho bằng một enzyme cắt hạn chế RE . Phân lập đoạn DNA gen quí phù hợp với vector và mục đích cần tạo dòng. Trong trường hợp đặc biệt để tạo dòng một gen chưa biết người nghiên cứu có thể tổng hợp hóa học đoạn DNA cần tạo dòng khi dự đoán cấu trúc protein do gen chỉ huy tổng hợp hoặc tổng hợp cDNA từ mRNA. Tạo đầu dính khi cần thiết. 2. Chọn và xử lí vector Chọn vector cần phải chú ý những yêu cầu sau độ lớn của gen lạ đoạn cài loại tế bào chủ tiếp nhận vector và phương pháp ứng dụng. Xử lí vector cắt vector bằng enzyme cắt hạn chế cùng loại với enzyme đã cắt DNA nói trên để tạo những vết cắt giống nhau thuận tiện cho việc nối ghép sau này . Khử nhóm phosphat bằng enzyme alkanline phosphotase để tránh hai đầu vector đóng kín trở lại. 3. Tạo DNA tái tổ hợp Vector tái tổ hợp Việc tạo DNA tái tổ hợp bằng cách ghép DNA lạ vào vector đã được cắt cùng một enzyme cắt hạn chế loại II khi đó chúng sẽ ghép đôi những đầu dính lại với nhau nhờ bắt cặp bổ sung. Một phản ứng ghép nối xảy ra với sự có mặt của enzyme DNA ligase của E. Coli hoặc phage T4 để hoàn chỉnh phân tử lai. 4. Chuyển DNA tái tổ hợp vào tế bào chủ bằng phương pháp biến nạp hoặc tải nạp Công đoạn này nhằm mục đích sử dụng bộ máy của tế bào chủ để sao chép vector tái tổ hợp thành một số lượng lớn bản sao. Việc chuyển DNA tái tổ hợp vào tế bào vi khuẩn tức là làm cho vi khuẩn trở thành khả biến nghĩa là có khả năng thấm vector tái tổ hợp. Sự thấm này có thể xảy ra một cách tự nhiên hoặc được cảm ứng. Tuy nhiên nó sẽ phụ thuộc vào loại plasmid sử dụng làm vector và phụ thuộc vào sự định vị của vùng cài lắp chứa bên trong vector mà người nghiên cứu sẽ chọn phương pháp biến nạp hoặc tải nạp. Biến nạp là hiện tượng chuyển vật chất di truyền trực tiếp từ .

• Sinh học
• tách dòng cơ bản
• phương pháp tách dòng
• công nghệ sinh học
• phương pháp thí nghiệm
• thí nghiệm sinh học
• Bài thuyết trình An toàn phòng thí nghiệm
• An toàn Sinh học PTN Y sinh
• Phòng thí nghiệm Y sinh
• Yêu cầu phòng thí nghiệm Y sinh
• Nguyên tắc phòng thí nghiệm Y sinh
• Nguy cơ phòn thí nghiệm Y sinh
• Đề tài nghiên cứu khoa học
• Thực hành thí nghiệm môn Hóa học
• Phương pháp hướng dẫn thí nghiệm Hóa học
• Hướng dẫn học sinh thí nghiệm Hóa học
• Các loại thí nghiệm Hóa học
• Các phương pháp dạy thí nghiệm
• Thí nghiệm công nghệ sinh học
• Thí nghiệm vi sinh vật học
• Vi sinh vật học
• Nghiên cứu vi sinh vật
• Bảo quản giống vi sinh vật
• Vi sinh vật gây bệnh
• Chất lượng giống vi sinh vật
• Giống vi sinh vật
• Môi trường nuôi cấy vi sinh vật
• Báo cáo thực tập
• Quá trình thí nghiệm năng lượng sinh học
• Thiết bị thí nghiệm năng lượng sinh học
• Phòng thí nghiệm năng lượng sinh học
• Thí nghiệm năng lượng sinh học
• Nghiên cứu ethanol từ rơm rạ
• Thí nghiệm đường cong sinh trưởng
• thí nghiệm với nấm men
• Tăng cường hứng thú học tập
• Hứng thú học tập
• Bài tập thí nghiệm
• Thí nghiệm giáo khoa
• Thí nghiệm tự tạo
• Thí nghiệm trên máy vi tính
• Thí nghiệm sự thẩm thấu tế bào
• Tính thấm của tế bào
• Sự thẩm thấu tế bào
• Thực hành thí nghiệm sinh học 10
• Thao tác thí nghiệm sinh học
• Phòng thí nghiệm
• An toàn sinh học
• An ninh sinh học phòng thí nghiệm
• Trang thiết bị phòng thí nghiệm
• Phòng thí nghiệm cơ bản
• Thí nghiệm vật lý
• Dạy học thí nghiệm vật lý
• Hướng dẫn sử dụng thí nghiệm vật lý
• Tổ chức thí nghiệm vật lý
• Phương pháp dạy học Vật lý
• Dạy học Vật lý theo hướng tích cực
• An toàn phòng thí nghiệm
• Nội quy phòng thí nghiệm
• An toàn hóa chất
• Dụng cụ phòng thí nghiệm
• Xây dựng E book học phần Thí nghiệm
• Thí nghiệm thực hành phương pháp dạy học
• Thí nghiệm Hóa học
• E book dạy học thí nghiệm Hóa học
• Dạy học tích cực
• Công nghệ thông tin trong dạy học
• Cách sử dụng thí nghiệm Hóa học
• Tổ chức hoạt động học tập tích cực
• Tổ chức học tập cho HS lớp 10
• Dạy học có sử dụng thí nghiệm
• Thiết kế thí nghiệm dạy học Hóa học
• Một số thí nghiệm về enzim
• pH đối với enzim
• Tính đặc hiệu của enzim
• Thí nghiệm tính đặc hiệu của enzim
• Thí nghiệm sinh học 6
• Sinh học 6
• Thực hành sinh học
• Thí nghiệm quang hợp
• Xác định chất khí thải
• Xác định chất lá cây
• Thí nghiệm vi sinh vật học thực phẩm
• Vi sinh vật học thực phẩm
• Phương pháp định lượng vi sinh vật
• Định lượng vi sinh vật
• Tính chất sinh lý vi sinh vật
• tế bào thực vật
• Luận án Tiến sĩ
• Luận án Khoa học Giáo dục
• Phương pháp dạy học bộ môn Hóa học
• Phát triển năng lực dạy học thí nghiệm
• Đào tạo sinh viên sư phạm hóa học
• Thí nghiệm thực hành Hoá
• Quan sát tế bào dưới kính hiển vi
• Thí nghiệm co nguyên sinh
• Thí nghiệm phản co nguyên sinh
• Cấu tạo tế bào
• Hình dạng tế bào
• Thí nghiệm hóa sinh thực phẩm
• Thí nghiệm hóa sinh
• Hóa sinh thực phẩm
• Tính chất của protein
• Tính chất động học của enzym ureaza
• Thí nghiệm tính chất của protein
• Chỉ tiêu vi sinh vật của thực phẩm
• Vệ sinh công nghiệp
• Kiểm tra vi sinh vật
• Đánh giá thực trạng thí nghiệm vật lí đại cương
• Nâng cao hiệu quả thí nghiệm vật lí đại cương
• Thí nghiệm vật lí đại cương
• Nâng cao chất lượng thực hành vật lí đại cương
• Thí nghiệm vật lí trong trường phổ thông
• Thí nghiệm Sinh học 7 Bài 52
• Thực hành Thí nghiệm Sinh học
• Giáo án điện tử Sinh học
• Thiết kế bài giảng Sinh học bài 52
• Sự sinh sản của thú
• Sự di chuyển của thú