TAILIEUCHUNG - Báo cáo y học: " Polyclonal antibody against the DPV UL46M protein can be a diagnostic candidate"

Polyclonal antibody against the DPV UL46M protein can be a diagnostic candidate | Lu et al. Virology Journal 2010 7 83 http content 7 1 83 VIROLOGY JOURNAL RESEARCH Open Access Polyclonal antibody against the DPV UL46M protein can be a diagnostic candidate Liting Lu 1 Anchun Cheng 1 2 3 Mingshu Wang 1 2 Jinfeng Jiang1 Dekang Zhu1 2 Renyong Jia2 Qihui Luo2 Fei Liu2 Zhengli Chen2 Xiaoyue Chen1 2 3 and Jinlong Yang2 4 Abstract Background The duck plague virus DPV UL46 protein VP11 12 is a 739-amino acid tegument protein encoded by the UL46 gene. We analyzed the amino acid sequence of UL46 using bioinformatics tools and defined the main antigenic domains to be between nucleotides 700-2 220 in the UL46 sequence. This region was designated UL46M. The DPV UL46 and UL46M genes were both expressed in Escherichia coli Rosetta DE3 induced by isopropy1-p-D-thiogalactopyranoside IPTG following polymerase chain reaction PCR amplification and subcloning into the prokaryotic expression vector pET32a . The recombinant proteins were purified using a Ni-NTA spin column and used to generate the polyclonal antibody against UL46 and UL46M in New Zealand white rabbits. The titer was then tested using enzyme-linked immunosorbent assay ELISA and agar diffusion reaction and the specificity was tested by western blot analysis. Subsequently we established Dot-ELISA using the polyclonal antibody and applied it to DPV detection. Results In our study the DPV UL46M fusion protein with a relative molecular mass of 79 kDa was expressed in E. coli Rosetta DE3 . Expression of the full UL46 gene failed which was consistent with the results from the bioinformatic analysis. The expressed product was directly purified using Ni-NTA spin column to prepare the polyclonal antibody against UL46M. The titer of the anti-UL46M antisera was over 1 819 200 as determined by ELISA and 1 8 by agar diffusion reaction. Dot-ELISA was used to detect DPV using a 1 60 dilution of anti-UL46M IgG and a 1 5 000 dilution of horseradish peroxidase HRP -labeled goat anti-rabbit IgG. .

TÀI LIỆU LIÊN QUAN
TAILIEUCHUNG - Chia sẻ tài liệu không giới hạn
Địa chỉ : 444 Hoang Hoa Tham, Hanoi, Viet Nam
Website : tailieuchung.com
Email : tailieuchung20@gmail.com
Tailieuchung.com là thư viện tài liệu trực tuyến, nơi chia sẽ trao đổi hàng triệu tài liệu như luận văn đồ án, sách, giáo trình, đề thi.
Chúng tôi không chịu trách nhiệm liên quan đến các vấn đề bản quyền nội dung tài liệu được thành viên tự nguyện đăng tải lên, nếu phát hiện thấy tài liệu xấu hoặc tài liệu có bản quyền xin hãy email cho chúng tôi.
Đã phát hiện trình chặn quảng cáo AdBlock
Trang web này phụ thuộc vào doanh thu từ số lần hiển thị quảng cáo để tồn tại. Vui lòng tắt trình chặn quảng cáo của bạn hoặc tạm dừng tính năng chặn quảng cáo cho trang web này.