TAILIEUCHUNG - chương 3:Các phương pháp xác định sự hiện diện và biểu hiện của gen ngoại lai

Southern blot là một trong những phương pháp trung tâm của Sinh học phân tử. Nó còn có tên gọi khác là Southern blotting, phương pháp lai Southern hay phương pháp lai DNA . Nguyên tắc của Southern blot là màng lai nitrocellulose có khả năng tiếp nhận DNA đã được biết từ lâu và đã được sử dụng trong các nghiên cứu lai axit nucleic khác nhau vào những thập niên 1950 và 1960. | Chương 3 Các phương pháp xác định sự hiện diện và biểu hiện của gen ngoại lai I. Southern blot Southern blot là một trong những phương pháp trung tâm của Sinh học phân tử. Nó còn có tên gọi khác là Southern blotting phương pháp lai Southern hay phương pháp lai DNA . Nguyên tắc của Southern blot là màng lai nitrocellulose có khả năng tiếp nhận DNA đã được biết từ lâu và đã được sử dụng trong các nghiên cứu lai axit nucleic khác nhau vào những thập niên 1950 và 1960. Vào thời kỳ này DNA cố định không được phân đoạn chỉ đơn giản bao gồm DNA tổng số được gắn trên màng lai nitrocellulose. Sự ra đời của phương pháp điện di trên gel vào đầu thập niên 1970 đã cho phép các đoạn DNA được cắt bởi enzyme hạn chế có thể được phân tách dựa trên cơ sở kích thước của chúng. Từ đó bước phát triển tiếp theo của phương pháp là chuyển các đoạn DNA phân tách từ gel lên màng lai nitrocellulose. Phương pháp này được E. M. Southern mô tả tại Đại học Edingburgh vào năm 1975. Phương pháp Southern blot đơn giản và hiệu quả. Mặc dù đã được cải tiến nhưng phương pháp đang được sử dụng ở nhiều phòng thí nghiệm sinh học phân tử sai khác không đáng kể so với phương pháp ban đầu. Southern blot bao gồm các bước cơ bản sau - Cắt DNA bằng enzyme hạn chế thích hợp. - Điện di sản phẩm cắt trên gel agarose. - Làm biến tính DNA thông thường khi nó còn ở trên gel ví dụ có thể nhúng nó vào trong dung dịch NaOH DNA sợi kép sẽ được tách thành DNA sợi đơn. Chỉ DNA sợi đơn mới có thể chuyển lên màng lai. 35 - Chuyển DNA đã biến tính lên màng lai. Thông thường màng lai được sử dụng là màng nitrocellulose. Người ta cũng có thể sử dụng màng nylon. Màng nitrocellulose điển hình có khả năng tiếp nhận 100pg DNA cm2 trong khi màng nylon có khả năng tiếp nhận 500pg DNA cm2. Mặt khác màng nylon có khả năng giữ DNA chắc hơn và ít đứt gãy hơn. Việc chuyển DNA thường được tiến hành bằng hoạt tính mao dẫn trong khoảng vài tiếng hoặc có thể dùng một thiết bị thấm chân không. Nếu dùng thiết bị thấm chân không thì sẽ .

• Sinh học
• gen ngoại lai
• aixt nucleoit
• đoạn DNA
• DNA phân tách
• enzyme hạn chế
• gel agarose
• công nghệ chuyển gen
• chuyển gen thực vật
• gen động vật
• công nghệ sinh học
• chuyển gen
• Di truyền học
• Chuyển gen động vật
• Nghiên cứu sinh vật học
• Đề tài vi sinh vật
• Điện di trên Agarose gel
• Ứng dụng Agarose gel
• Vai trò Agarose gel
• Agarose gel là gì
• Chế tác gel agarose
• Điện di gel agarose
• Kiểm tra băng DNA
• các bước chuẩn bị điện di
• Ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử
• Luận văn Thạc sĩ Khoa học
• Sinh học thự nghiệm
• Agarose Curldan
• Ức chế yếu tố hoại tử
• Đại thực bào RAW264 7
• Mô hình tế bào RAW264 7
• luận văn thạc sĩ
• luận văn sinh học
• Chất hoạt hóa plasminogen
• Chất hoạt hóa plasminogen mô người
• quá trình làm tan máu đông
• Điện di DNA trên gel agarose
• Điện di protein trên gel polyacrylamide
• Agarose gel electrophoresis
• Genetic diversity
• ISSR primers
• Susceptible genotypes
• Genetic diversity in upland cotton
• Barcode primers
• PCR amplified products
• Species discrimination of fabaceae family
• Basis of length variation
• Tên khoa học của cây đinh lăng trổ
• Cây đinh lăng trổ
• Pháp giải trình tự GEN RBCL
• Điện di ADN trên gel agarose
• Khuếch đại ADN bằng phản ứng PCR
• Sinh học phân tử
• Kỹ thuật sinh học phân tử
• Phương pháp điện di trong gel
• Phát triển sinh học phân tử
• Nghiên cứu phát triển sinh học phân tử
• Lạc Arachis hipogaea L
• Kĩ thuật RAPD
• Đa dạng di truyền
• Bảo tồn gen
• Phương pháp tách chiết ADN
• Phương pháp điện di ADN tổng số trên gel agarose
• Luận văn Thạc sĩ Sinh học
• Rong biển thuộc chi Ulva
• Sinh học thực nghiệm
• Sinh học phân tử DNA barcoding
• Phương pháp điện di Gel agarose