TAILIEUCHUNG - Nghiên cứu ứng dụng công nghệ sinh học phân tử để tách dòng gen mã hóa enzyme Luciferase
Trên trình tự gen này không có vị trí cắt của các enzyme giới hạn là HindIII, BamHI, NdeI, XhoI, do đó chúng tôi đã thiết kế thêm trình tự nhận biết của hai enzyme NdeI vào đầu 5' và HindIII vào đầu 3' của gen mã hóa luciferase để phục vụ cho mục đích biểu hiện và sản xuất enzyme này bằng phương pháp tái tổ hợp. | Nghiên cứu ứng dụng công nghệ sinh học phân tử để tách dòng gen mã hóa enzyme Luciferase Hóa học & Kỹ thuật môi trường NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG CÔNG NGHỆ SINH HỌC PHÂN TỬ ĐỂ TÁCH DÒNG GEN MÃ HÓA ENZYME LUCIFERASE Trần Thị Thanh Quỳnh1, Tô Văn Thiệp1, Nguyễn Văn Hoàng1, Trần Thị Thu Hường1, Lê Duy Khánh1, Nguyễn Đình Hưng1, Phạm Kiên Cường1* Tóm tắt: Đoạn gen mã hóa cho enzyme luciferase từ đom đóm ở Việt Nam đã được nhân dòng thành công vào vector pGEMT bằng phương pháp RT-PCR (Reverse transcription-Polymerase chain reaction) và ứng dụng các kỹ thuật sinh học phân tử khác. Sau đó, plasmid mang đoạn gen này (pGEM-luciferase) đã được biến nạp vào tế bào và giải trình tự. Kết quả cho thấy: đoạn gen có kích thước khoảng 1,6 kb, có trình tự tương đồng 100% so với trình tự đã công bố trên ngân hàng gen thế giới (). Trên trình tự gen này không có vị trí cắt của các enzyme giới hạn là HindIII, BamHI, NdeI, XhoI, do đó chúng tôi đã thiết kế thêm trình tự nhận biết của hai enzyme NdeI vào đầu 5' và HindIII vào đầu 3' của gen mã hóa luciferase để phục vụ cho mục đích biểu hiện và sản xuất enzyme này bằng phương pháp tái tổ hợp. Từ khóa: Enzyme luciferase, Đom đóm, Nhân dòng luciferase. 1. MỞ ĐẦU Luciferase là nhóm enzyme có khả năng xúc tác cho phản ứng phát quang sinh học, thuộc họ protein dạng aldelynate, có một nhóm oxy-4-oxidoreductase để thực hiện hoạt động khử carboxyl hóa và thủy phân ATP. Hiện nay đã có trên 20 loại luciferase khác nhau đã được xác định dựa vào nguồn gốc và cơ chế tác dụng của chúng. Trong đó, luciferase của đom đóm được tập trung nghiên cứu nhiều nhất [1,2,3]. Một trong những ứng dụng quan trọng của luciferase là để phát hiện tổng số vi sinh vật và kiểm tra mức độ an toàn của lương thực, thực phẩm và phát hiện sớm mức độ nhiễm khuẩn của bề mặt vật thể trong chế biến cũng như bảo quản lương thực, thực phẩm và y dược, với hệ thống enzym-cơ chất cực nhạy của đom đóm. So với .
đang nạp các trang xem trước
