TAILIEUCHUNG - Protein Purification Part 15

Tham khảo tài liệu 'protein purification part 15', khoa học tự nhiên, công nghệ sinh học phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả | Phosphoproteomics 203 A. IMAC suffers of aspecific binding of acidic peptides to the resin. Esterification of carboxylic groups with Methanol HCl is a strategy to overcome this problem. B. In presence of a strong base the P-elimination at phosphoserine and phosphothreonine produces dehydroanaline and P-aminobutyric acid. These can be derivatised with a thiol through a Michael-like addition and a tag can be added. If the tag is biotin its affinity with avidin can be exploited. C. FPs can be derivatised to phosphoramidates after esterification of carboxylic groups. If a dendrimer is employed the derivatised peptides can be separated through size-selective methods. D. P-elimination and Michael-like addition of cysteamine converts phosphoserine and phosphothreonine in lysine analogues that specific enzymes leave in the C-terminus. Phosphoramidate conversion In 2005 Aebersold s group proposed a derivatisation procedure based on the carboxyl protection through methyl esterification followed by conjugation to a soluble polymer with phosphoramidate chemistry PAC Tao et al. 2005 . The mixture of peptides is first converted to the corresponding methyl esters. In this step two cellular states can also be differentially labeled for quantitative analysis. Subsequently the methylated peptides are combined and put to react with EDC imidazole and a polyamine dendrimer. Phosphopeptides are converted in the corresponding phosphoramidates easily separated from the non FPs through size selective methods. FPs are recovered with a brief acid hydrolysis and sent to the MS analysis. When coupled with pervanadate stimulation and an initial antiphosphotyrosine protein precipitation step this method allowed the identification and quantification of all known plus previously unknown phosphorylation sites in 97 tyrosine proteins in Jurkat T cells. A modification of this method was proposed Bodenmiller et al. 2007 exploiting the reaction of the phosphate groups with cystamine and a .

TÀI LIỆU LIÊN QUAN
TỪ KHÓA LIÊN QUAN
TAILIEUCHUNG - Chia sẻ tài liệu không giới hạn
Địa chỉ : 444 Hoang Hoa Tham, Hanoi, Viet Nam
Website : tailieuchung.com
Email : tailieuchung20@gmail.com
Tailieuchung.com là thư viện tài liệu trực tuyến, nơi chia sẽ trao đổi hàng triệu tài liệu như luận văn đồ án, sách, giáo trình, đề thi.
Chúng tôi không chịu trách nhiệm liên quan đến các vấn đề bản quyền nội dung tài liệu được thành viên tự nguyện đăng tải lên, nếu phát hiện thấy tài liệu xấu hoặc tài liệu có bản quyền xin hãy email cho chúng tôi.
Đã phát hiện trình chặn quảng cáo AdBlock
Trang web này phụ thuộc vào doanh thu từ số lần hiển thị quảng cáo để tồn tại. Vui lòng tắt trình chặn quảng cáo của bạn hoặc tạm dừng tính năng chặn quảng cáo cho trang web này.