TAILIEUCHUNG - Nghiên cứu tinh chế và xác định hoạt tính của Enterokinase tái tổ hợp

Nghiên cứu trình bày các kết quả nghiên cứu tinh chế và đánh giá hoạt tính của enterokinase chuỗi nhẹ tái tổ hợp. Protein pha không tan đã được tái cấu trúc với phương pháp biến tính bằng guanidin và được tái cuộn gập trong các đệm phù hợp. | Tạp chí Công nghệ Sinh học 19 4 651-658 2021 NGHIÊN CỨU TINH CHẾ VÀ XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH CỦA ENTEROKINASE TÁI TỔ HỢP Lương Kim Phượng1 3 Đỗ Thị Huyền1 2 Lê Thị Thu Hồng1 2 1 Viện Công nghệ sinh học Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam 2 Học Viện Khoa học và Công nghệ Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam 3 Trường Đại học Khoa học tự nhiên Đại học Quốc gia Hà Nội Người chịu trách nhiệm liên lạc. E-mail lethuhong@ dohuyen@ Ngày nhận bài Ngày nhận đăng TÓM TẮT Enterokinase là một serine protease trong đó chuỗi nhẹ chứa vùng xúc tác có khả năng nhận biết và cắt đặc hiệu đoạn trình tự peptide nên thường được ứng dụng nhiều nhất trong nghiên cứu để cắt đoạn protein dung hợp trong chuỗi polypeptide giải phóng protein đích. Trong công bố trước vùng xúc tác của enterokinase đã được biểu hiện dưới dạng dung hợp với thioredoxin Trx để tạo protein lai Trx-Ent. Protein Trx-Ent ở pha không tan đã bước đầu được tái cấu trúc tạo enzyme có hoạt tính tự cắt khỏi Trx để giải phóng Ent hoàn thiện. Trong nghiên cứu này chúng tôi trình bày các kết quả nghiên cứu tinh chế và đánh giá hoạt tính của enterokinase chuỗi nhẹ tái tổ hợp. Protein pha không tan đã được tái cấu trúc với phương pháp biến tính bằng guanidin và được tái cuộn gập trong các đệm phù hợp. Mẫu enterokinase sau đó đã được tinh chế bỏ Trx và dạng dung hợp bằng tủa phân đoạn ethanol ở nồng độ 20 . Enterokinase sau tinh chế có độ tinh sạch 82 hàm lượng là 15 6 mg trong 1 lit lên men với hiệu suất thu hồi đạt 8 2 . Kết quả xác đinh hoạt tính enterokinase sử dung cơ chất là protein dung hợp Trx-FliC đạt là 230 unit µg giá trị này tính tương đương với hoạt tính enterokinase của hãng Invitrogen. Kết quả này là cơ sở để ứng dụng enterokinase tái tổ hợp này trong nghiên cứu sản xuất protein tái tổ hợp. Từ khoá cơ chất Trx-Flic enterokinase hoạt tính tinh chế tái tổ hợp MỞ ĐẦU trong đó chuỗi nặng có kích thước khoảng 82 140 kDa có chức năng neo giữ enterokinase vào màng .

• Sinh học
• Cơ chất Trx Flic
• Đặc hiệu trình tự peptide
• Enterokinase tái tổ hợp
• Tái cấu trúc tạo enzyme
• Tách chiết enterokinase tự nhiên