TAILIEUCHUNG - Nghiên cứu thiết lập kỹ thuật seminested PCR phát hiện nấm Candida albicans

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm xác định các điều kiện của kỹ thuật seminested PCR phát hiện nấm Candida albicans và thử nghiệm áp dụng kỹ thuật seminested PCR đ xác định một s ch ng nấm Candida albicans phân lập Việt Nam. | TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 6-2015 NGHIÊN CỨU THIẾT LẬP KỸ THUẬT SEMINESTED PCR PHÁT HIỆN NẤM CANDIDA ALBICANS Đỗ Ngọc Ánh*; Hoàng Cao Sạ** Đoàn Ngọc Giang Lâm***; Phạm Văn Minh* TÓM TẮT Mục tiêu: xác định điều kiện và thử nghiệm áp dụng kỹ thuật seminested PCR phát hiện nấm Candida albicans. Phương pháp: thiết lập kỹ thuật seminested PCR trên cơ sở gen đích mã hóa ® rARN của chủng nấm Candida albicans ATCC 90028 và đánh giá thử trên 27 chủng nấm Candida albicans phân lập ở Việt Nam. Kết quả: xác định đƣợc điều kiện phản ứng PCR1, PCR2 cũng 2+ nhƣ ngƣỡng phát hiện, tính đặc hiệu của kỹ thuật. PCR 1: nồng độ Mg 1,5 mM, dNTPs 150 µM, o 2+ nồng độ mồi 0,2 - 0,3 pmol/µl và nhiệt độ gắn mồi là 55 C. PCR2: nồng độ Mg 2,0 mM, dNTPs o 200 µM, nồng độ mồi 0,2 pmol/µl và nhiệt độ gắn mồi 55,2 C. Kỹ thuật seminested PCR có khả năng phát hiện chính xác nấm C. abicans ở ngƣỡng ≥ 10 pg/µl. Sau khi đƣợc thiết lập, đánh giá kỹ thuật trên ADN của 27 chủng C. albicans phân lập ở Việt Nam, kết quả cho thấy, cả 27 chủng đều cho band đặc hiệu có kích thƣớc 410 bp nhƣ mong đợi. Kết luận: kỹ thuật seminested PCR thu đƣợc cho phép xác định chính xác nấm Candida albicans. * Từ khóa: Candida albicans; Seminested PCR. Development of Seminested PCR for Detection of Candida Albicans Summary Aims: To establish and evaluate a system of seminested polymerase chain reaction (PCR) ® assays to identify Candida albicans. Methods: DNA of Candida albicans ATCC 90028 and 27 samples from Vietnam was extracted and used as a template in PCR assays targeting the ribosomal DNA of Candida albicans. Results: PCR1 and PCR2 assays were optimized to 2+ detect exactly rRNA gene of Candida albicans. PCR1 with mM Mg , 150 µM of each o deoxyribonucleotide, - pmol/µl of each primer and annealing temperature 55 C. PCR2 2+ with mM Mg , 200 µM of each deoxyribonucleotide, pmol/µl of each primer and annealing o temperature C. The limited concentration for detection of C. albicans was not .

• Y học thường thức
• Kỹ thuật seminested PCR
• Nấm Candida albicans
• Chủng nấm Candida albicans phân lập Việt Nam
• Phương pháp xét nghiệm chẩn đoán nấm
• Trình tự đoạn gen 410 bp của nấm Candida albicans