TAILIEUCHUNG - Realtime PCR Nguyên tắc và ứng dụng

PCR và phát hiện sản phẩm bằng điện di trên gel agarose 1. Phát hiện điểm cuối (End-Point Detection) 2. Độ đặc hiệu kém 3. Độ nhạy thấp 4. Độ phân giải kém 4. Chỉ phân biệt dựa trên kích thước sản phẩm PCR 5. Phải xử lý sau PCR, dễ ngoại nhiễm 6. Chạy gel nhờ Ethidium bromide (chất gây ung thư) | TS. BS. Đỗ Thị Thanh Thủy Realtime PCR Nguyên tắc và ứng dụng PCR PCR VÀ GIỚI HẠN CỦA PCR PCR và phát hiện sản phẩm bằng điện di trên gel agarose 1. Phát hiện điểm cuối (End-Point Detection) 2. Độ đặc hiệu kém 3. Độ nhạy thấp 4. Độ phân giải kém 4. Chỉ phân biệt dựa trên kích thước sản phẩm PCR 5. Phải xử lý sau PCR, dễ ngoại nhiễm 6. Chạy gel nhờ Ethidium bromide (chất gây ung thư) REALTIME PCR → Real-time PCR là phản ứng PCR mà quá trình nhân bản DNA được theo dõi trực tiếp trên máy luân nhiệt theo từng chu kỳ nhiệt. Kiểm soát tín hiệu huỳnh quang phát ra trong mỗi chu kỳ phản ứng (tỉ lệ với lượng sản phẩm PCR tạo thành trong từng chu kỳ nhiệt - Real time). Phát hiện và định lượng nồng độ sản phẩm sau mỗi chu kỳ nhiệt dựa trên cường độ phát huỳnh quang. REALTIME PCR HOẠT ĐỘNG CỦA MÁY REALTIME PCR Kính lọc kích thích Kính lọc phát sáng Nguồn: laser, LED, đèn tungsten-halogen Detector: CCD (charge coupled device), PMT (photomultiplier tube) 1 10 102 103 104 105 106 1 10 102 103 104 105 106 Cycle 15 Cycle 19 Cycle 23 Cycle 26 Cycle 29 Cycle 31 Cycle 33 Cycle 34 Cycle 36 Cycle 39 Cycle 41 Cycle 13 Cycle 11 1 10 102 103 104 105 106 Cycle 15 Cycle 19 Cycle 23 Cycle 26 Cycle 29 Cycle 31 Cycle 33 Cycle 34 Cycle 36 Cycle 39 Cycle 41 Cycle 13 Cycle 11 1 10 102 103 104 105 106 Mẫu chưa biết [C] Standard curve PHƯƠNG TRÌNH TÍNH SỐ COPY/MẪU Threshold: điểm bắt đầu quan sát được tín hiệu huỳnh quang phát ra, tại thời điểm này tín hiệu do sản phẩm PCR > tín hiệu nền. - Ct (Threshold cycle): là số chu kỳ mà tại đó tín hiệu huỳnh quang của sản phẩm khuếch đại vượt qua ngưỡng. Động học RealtimePCR Phân tích tiến trình phản ứng trong mỗi chu kỳ nhiệt nhờ computer THỜI ĐIỂM PHÁT HIỆN TÍN HIỆU REALTIME PCR REALTIME PCR Rael time PCR định lượng số copies trong giai đoạn tăng lũy thừa Log view Primers Taq polymerase dNTP PCR buffer MgCl2 Real-time PCR MIX Target DNA (Template) Real-time PCR mix Chất phát huỳnh quang 1. Chất nhuộm khi chèn .

• Y học thường thức
• Realtime PCR
• ứng dụng Realtime PCR
• tài liệu Realtime PCR
• bệnh học đại cương
• giải phẩu học
• phác đồ điều trị
• y cơ sở
• ngoại cơ sở
• Kinh nghiệm xây dựng PCR/realtime PCR
• Phát triển PCR/realtime PCR
• Kỹ thuật sinh học phân tử
• Tác nhân vi sinh
• Phương tiện vi sinh
• Phân biệt thịt bò trâu heo
• Kỹ thuật Multiplex Realtime PCR
• Quy trình multiplex realtime PCR nhận diện DNA
• Gian lận thương mại
• Quy trình multiplex realtime PCR
• Ứng dụng kỹ thuật Realtime PCR
• Kỹ thuật Realtime PCR
• Đột biến 455G A trên gen Fibrinogen Beta
• Bệnh nhân nhồi máu cơ tim trẻ tuổi
• Nhồi máu cơ tim trẻ tuổi
• Phát hiện RSV ở bệnh nhi dưới 5 tuổi
• Phát hiện RSV
• Kỹ thuật realtime RT PCR
• Kỹ thuật RT PCR truyền thống
• Hô hấp do RSV
• Luận văn Thạc sĩ Sinh học ứng dụng
• Công nghệ sinh học
• Quy trình phát hiện Microsporidia
• Viêm loét giác mạc
• Kỹ thuật PCR
• Luận án Tiến sĩ
• Actinobacillus actinomycetemcomitans
• Porphyromonas gingivalis
• Viêm quanh răng
• Realtime PCR
• Điều trị viêm quanh răng không phẫu thuật
• Tạp chí khoa học
• Tạp chí y dược
• Y dược Quân sự
• Định lượng ADN phôi thai
• Phương pháp Realtime PCR
• Chẩn đoán trước sinh
• Kỹ thuật ASB RealTime PCR
• Ung thư tuyến giáp thể nhú
• Đột biến gen brafT1799A
• Tạp chí nghiên cứu y học
• Xác định tỷ lệ nhiễm Adenovirus
• Đặc điểm dịch tễ ở trẻ em
• Điều trị tại bệnh viện nhi Trung ương
• Bệnh viện nhi Trung ương
• Ứng dụng kỹ thuật realtime PCR
• Chẩn đoán virus túi (sacbrood virus) nhiễm
• Đàn ong mật nuôi
• Thủ đô Hà Nội
• Luận văn Thạc sĩ
• Luận văn Khoa học
• Phương pháp realtime PCR đa mồi
• Nhiễm trùng huyết ở trẻ em
• phương pháp cấy máu truyền thống
• Bệnh gia cầm
• Virus cúm A H5N6
• Sự lưu hành dịch bệnh gia cầm
• Phương pháp Realtime – PCR
• Virus cúm A N6
• Virus cúm A H5
• Bài viết về y học
• Realtime PCR đa mồi
• Bệnh nhi mắc tiêu chảy
• Vi khuẩn E
• coli
• Tạp chí Phụ sản
• Tiền sản giật
• Huyết tương thai phụ
• Nội mạc mạch máu
• Định lượng SERPINE1 MRNA
• Nguồn gốc nhau thai
• Phương pháp chọc ối PCR Realtime
• Chọc hút dịch ối
• Thai nhi nhiễm virus Rubella
• Bệnh viện Phụ sản Trung ương
• Viêm phổi liên quan thở máy
• Multiplex realtime PCR
• Kháng sinh điều trị viêm phổi
• Nhiễm trùng sơ sinh
• Streptococcus agalactiae
• Phản ứng realtime PCR
• Chlamydia trachomatis
• Nhiễm trùng huyết sơ sinh
• Y dược lâm sàng
• Phương pháp realtime PCR
• Nhiễm lậu cầu
• Bệnh phẩm cổ tử cung
• Kỹ thuật y sinh học phân tử
• Luận án Tiến sĩ Sinh học
• Bộ sinh phẩm multiplex realtime PCR
• Nhiễm khuẩn bệnh viện
• Tính kháng kháng sinh
• Gen mã hoá beta lactamase
• Nghiên cứu y học
• Ung thư cổ tử cung
• Nhiễm HPV ở phụ nữ
• Tế bào học cổ tử cung
• Phương pháp Aptima HPV
• Phương pháp realtime PCR HPV
• Kỹ thuật Realtime–PCR
• Kỹ thuật Severse Dot Blot
• Vi khuẩn Human Papillomavirus
• Virus ký sinh
• Tế bào biểu bì gan tụy
• Tế bào biểu bì ruột của tôm
• Phương pháp duplex realtime PCR
• Chuẩn đoán bệnh virus ở tôm
• Vai trò của multplex realtime PCR
• Điều trị viêm phổi thở máy
• Nhóm chứng nuôi cấy đờm
• Dịch phế quản