TAILIEUCHUNG - Luận văn : Sử dụng kỹ thuật multiplex – PCR để phát hiện đồng thời các gen độc: stx1, stx2, eae, ehxA, và uid của E. coli part 3

19 . Cách lấy mẫu và bảo quản mẫu - Dùng muỗng vô trùng lấy phần giữa cục phân (khoảng 10 -12 g) mà bò, heo vừa mới thải ra, cho vào túi nylon vô trùng, buộc kỹ, bảo quản 4 - 80C và chuyển về phòng thí nghiệm càng nhanh càng tốt. Phân tiêu chảy có thể được lấy bằng cách dùng tăm bông, cho vào môi trường chuyên chở Carry Blair, chuyển về phòng thí nghiệm. - Quét bề mặt thịt bò bằng gạc hoặc tăm bông vô trùng, cho vào ống nghiệm chứa sẵn nước pepton đệm | 19 . Cách lấy mẫu và bảo quản mẫu - Dùng muỗng vô trùng lấy phần giữa cục phân khoảng 10 -12 g mà bò heo vừa mới thải ra cho vào túi nylon vô trùng buộc kỹ bảo quản 4 - 80C và chuyển về phòng thí nghiệm càng nhanh càng tốt. Phân tiêu chảy có thể được lấy bằng cách dùng tăm bông cho vào môi trường chuyên chở Carry Blair chuyển về phòng thí nghiệm. - Quét bề mặt thịt bò bằng gạc hoặc tăm bông vô trùng cho vào ống nghiệm chứa sẵn nước pepton đệm. . Nuôi cấy và phân lập E. coli . Môi trường nuôi cấy Môi trường tăng sinh Do số lượng nhóm STEC đặc biệt là E. coli gây bệnh hiện diện trong thực phẩm rất ít cho nên trước khi phân lập chúng tôi sử dụng môi trường tăng sinh pepton đệm có bổ sung kháng sinh cefixime 0 0125mg L và vancomycin 8mg L FDA 2002 để ức chế các vi khuẩn gram dương và vi khuẩn sống hoại sinh khác. Môi trường phân lập Để xác định môi trường nào cho kết quả tốt khi phân lập E. coli nhóm STEC mang gen độc lực chúng tôi sử dụng 3 loại môi trường MAC SMAC và CT - SMAC. Môi trường phân lập là môi trường MacConkey MAC Sorbitol MacConkey SMAC và Sorbitol MacConkey CT - SMAC có bổ sung kháng sinh cefixime 0 05mg L và tellurite 2 5mg L FDA 2002 . Khoảng 90 E. coli đều lên men đường lactose trên môi trường MAC E. coli điển hình có khuẩn lạc màu đỏ hồng. Trên môi trường SMAC và CT - SMAC E. coli không lên men đường sorbitol nên cho khuẩn lạc màu trắng những dòng E. coli lên men sorbitol cho khuẩn lạc màu hồng. Việc tầm soát E. coli nhóm STEC trên phân bệnh phẩm trên thạch SMAC CT -SMAC là công cụ ban đầu phát hiện serotype O157 thuộc nhóm STEC. . Qui trình phân lập định tính 1 Nuôi cấy và phân lập E. coli hiện diện trong phân với số lượng lớn nên phân heo hoặc bò sau khi thu thập và chuyển về phòng thí nghiệm được tiến hành ria trực tiếp trên môi trường thạch 20 đĩa MAC và SMAC ủ 370C trong 18 - 24giờ chọn và thu khuẩn lạc điển hình giữ gốc. Li trích DNA rồi thực hiện multiplex - PCR để phát hiện các gen độc lực. Riêng đối với mẫu bề

TỪ KHÓA LIÊN QUAN
TAILIEUCHUNG - Chia sẻ tài liệu không giới hạn
Địa chỉ : 444 Hoang Hoa Tham, Hanoi, Viet Nam
Website : tailieuchung.com
Email : tailieuchung20@gmail.com
Tailieuchung.com là thư viện tài liệu trực tuyến, nơi chia sẽ trao đổi hàng triệu tài liệu như luận văn đồ án, sách, giáo trình, đề thi.
Chúng tôi không chịu trách nhiệm liên quan đến các vấn đề bản quyền nội dung tài liệu được thành viên tự nguyện đăng tải lên, nếu phát hiện thấy tài liệu xấu hoặc tài liệu có bản quyền xin hãy email cho chúng tôi.
Đã phát hiện trình chặn quảng cáo AdBlock
Trang web này phụ thuộc vào doanh thu từ số lần hiển thị quảng cáo để tồn tại. Vui lòng tắt trình chặn quảng cáo của bạn hoặc tạm dừng tính năng chặn quảng cáo cho trang web này.