TAILIEUCHUNG - Báo cáo " Nghiên cứu một số tính chất của Taq ADN polymerase "

Taq ADN polymerase (Taq) là enzym xúc tác cho phản ứng tổng hợp ADN được tách ra từ loài vi khuẩn ưa nhiệt Thermus aquaticus và đã được nghiên cứu khá kỹ về tính chất [1, 2, 3]. Thậm chí gen của Taq đã được nhân dòng và biểu hiện thành công trong E. coli [3]. Nhờ tính chất bền với nhiệt, hoạt tính polymerase và khả năng bổ sung gốc adenosin (A) vào đầu 3’ của chuỗi ADN dạng sợi kép nên sau khi được phát hiện, Taq đã trở thành công cụ hết sức hữu ích của các nghiên cứu sinh học phân. | TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐHQGHN KHTN CN So 3 2005 NGHIÊN cứu MỘT số TÍNH CHAT CỦA TAQ ADN POLyMERASE Phan Tuấn Nghĩa Nguyen Thị Hồng Loan Ngô Thu H ờng Lê Hà Mi Khoa Sinh học Trường Đại học Khoa học Tự nhiên ĐHQGHN 1. Mở đầu Taq ADN polymerase Taq là enzym xúc tác cho phản ứng tổng hợp ADN đ Ợc tách ra từ loài vi khuẩn a nhiệt Thermus aquaticus và đã đ Ợc nghiên cứu khá kỹ về tính chất 1 2 3 . Thậm chí gen của Taq đã đ Ợc nhân dòng và biểu hiện thành công trong E. coli 3 . Nhò tính chất bền vối nhiệt hoạt tính polymerase và khả năng bổ sung gốc adenosin A vào đầu 3 của chuỗi ADN dạng sợi kép nên sau khi đ Ợc phát hiện Taq đã trỏ thành công cụ hết sức hữu ích của các nghiên cứu sinh học phân tử đặc biệt là của các nghiên cứu nhân bản gen. Nghiên cứu của chúng tôi là nhằm góp phần tìm hiểu thêm một số tính chất của Taq giúp cho việc sử dụng enzym hiệu quả hơn và bài báo này giối thiệu kết quả nghiên cứu gây kháng thể kháng Taq trên chuột sự t ơng tác của kháng thể vối một số ADN polymerase khác nhau cũng nh ảnh h ỏng của một số hợp chất khác nhau lên hoạt tính tổng hỢp ADN của Taq. 2. Nguyên liệu và ph ơng pháp nghiên cứu Hoá chất chính sử dụng cho nghiên cứu gồm các oligonucleotit thang chuẩn ÀHind III 1 kb và 250 bp đ Ợc mua từ hãng Invitrogen Mỹ . Thang chuẩn protein đ Ợc mua từ hãng Amersham Mỹ Agarose Tris-base EDTA SDS isopropanol đ Ợc mua từ hãng Sigma Mỹ . Các hoá chất còn lại đều đạt độ tinh khiết dành cho nghiên cứu sinh học phân tử. PCR đ Ợc tiến hành vối tổng thể tích phản ứng là 25 gl thành phần các hỢp phần nh sau 3-5 ng ADN khuôn là đoạn gen 0 8 kb đ Ợc gắn vào vectơ pBluescript 2 5 đệm phản ứng 10x dNTP mỗi loại 0 4 mM 25 ng mồi T3 và 25 ng mồi T7 2 5 đơn vị Taq ADN polymerase. Chế độ nhiệt cho phản ứng 94oC-3 phút để khỏi động nóng tiếp theo là 32 chu kỳ của 3 b ốc 94oC-1 phút để làm biến tính ADN 55oC-1 phút để gắn mồi và 72oC-1 phút để kéo dài chuỗi. Mẫu sau đó đ Ợc ủ tiếp ỏ 72oC trong 7 phút và giữ ỏ 4oC cho đến khi phân tích. Sản phẩm PCR đ Ợc

• Báo cáo khoa học
• Taq ADN polymerase
• enzym xúc tác
• vi khuẩn ưa nhiệt
• đề tài nghiên cứu
• nghiên cứu khoa học phản ứng tổng hợp ADN
• Tạp chí khoa học
• Tạp chí sinh học
• Công nghệ sinh học
• Enzyme tái tổ hợp
• Hotstart Taq ADN polymerase
• Protein tái tổ hợp