TAILIEUCHUNG - Nghiên cứu tạo chủng escherichia coli tái tổ hợp biểu hiện interleukin-3 và interleukin-11 người dưới dạng lai với PelB
Trong bài viết này, chúng tôi thiết kế tín hiệu tiết PelB ngay trước gen il-3 và il-11 để định hướng biểu hiện protein IL-3 và IL-11 người tái tổ hợp ở khoang chu chất của E. coli, đồng thời tránh sự gắn không mong muốn của methionin vào đầu chuỗi polypeptide mới tổng hợp. | TẠP CHÍ SINH HỌC, 2013, 35(3se): 94-99 NGHIÊN CỨU TẠO CHỦNG ESCHERICHIA COLI TÁI TỔ HỢP BIỂU HIỆN INTERLEUKIN-3 VÀ INTERLEUKIN-11 NGƯỜI DƯỚI DẠNG LAI VỚI PelB Nguyễn Thị Quý, Dương Thu Hương, Lê Ngọc Giang, Lê Thị Thu Hồng, Đỗ Thị Huyền, Trương Nam Hải* Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm KH & CN Việt Nam, *tnhai@ TÓM TẮT: Interleukin-3 (IL-3) và Interleukin-11 (IL-11) là những cytokine đa chức năng, đóng vai trò điều hòa sự nhân lên, biệt hóa và trưởng thành của nhiều loại tế bào máu. Gen mã hóa cho protein IL-3 và IL-11 của người (mã số NM_000588 và NM_000641 trên ngân hàng gen quốc tế) được tổng hợp nhân tạo cùng tín hiệu tiết pelB và trình tự nhận biết của hai enzyme hạn chế NdeI ở đầu 5' và NotI ở đầu 3', được đưa vào vector tách dòng pUC57. Sau đó toàn bộ đoạn DNA được chuyển vào vị trí NdeI- NotI của vector biểu hiện pET22b(+) để tiến hành biểu hiện gen il-3, il-11 trong vi khuẩn E. coli BL21. Kết quả cho thấy ở 37oC và nồng độ chất cảm ứng là 0,5 mM IPTG, IL-3 được biểu hiện dưới hai dạng: dạng đơn (IL-3 nguyên vẹn đã được cắt bỏ tín hiệu tiết PelB) có kích thước khoảng 15 kDa và dạng lai với tín hiệu tiết PelB (khoảng 18 kDa). Protein IL-11 biểu hiện ở mức độ thấp và ở dạng đơn, có kích thước khoảng 19 kDa đúng với kích thước của protein IL-11 chuẩn. Từ khóa: Escherichia coli, Interleukin-3, Interleukin-11, Isopropylthio-β-galactoside (IPTG), tín hiệu tiết PelB. MỞ ĐẦU Interleukin-11 (IL-11) là một cytokine thuộc họ Interleukin-6, đóng vai trò điều hòa sự nhân lên, biệt hóa và trưởng thành của nhiều loại tế bào máu. Theo Souto et al. (2012) [6], protein IL-11 người tái tổ hợp sản xuất bằng công nghệ DNA tái tổ hợp từ chủng E. coli hiện nay được sử dụng trên toàn thế giới để phòng bệnh giảm tiểu cầu sau hóa trị liệu và giảm nhu cầu truyền tiểu cầu đối với bệnh nhân bị u tủy ác tính. Interleukin 3 (IL-3) cũng là một cytokine có bản chất là glycoprotein, tham gia vào quá trình tự đổi mới và sống sót của các tế bào nguồn tạo máu, sự nhân lên, biệt
đang nạp các trang xem trước
