TAILIEUCHUNG - Giáo trình CÔNG NGHỆ DNA TÁI TỔ HỢP - Chương 6

Chương 6 Tạo dòng và xây dựng thư viện cDNA 1. Tách chiết ,tinh sạch và phân tích RNA: Tách chiết RNA tổng hợp: - Kiểm soát hoạt tính ribonuclease. - Nguyên lý: Phương pháp tách chiết RNA tổng số bao gồm các bước cơ bản giống tách chiết DNA | Chương 6 Tạo dòng và xây dựng thư viện cDNA I. Tách chiết tỉnh sạch và phân tích RNA 1. Tách chiết và tinh sạch RNA . Tách chiết RNA tổng số - Kiểm soát hoạt tính ribonuclease. Các phân tử RNA không bền dễ bị phân hủy bởi cắc ribonuclease RNase . Để thu được dịch chiết RNA có chất lượng tốt. cần phải giảm thiểu hoạt tính của RNase được giải phóng trong suốt quá trình sinh tan tế bào hoặc từ các nguồn tiềm tàng khác trong phòng thí nghiệm dụng cụ bàn làm việc bàn tay của kỹ thuật viên. bằng các nhân tố ức chế RNase bao gồm các nhân tố ức chế protein của RNase các phức hợp vanadyl-ribonucleoside hoặc macaloid. - Nguyên lý. Phương pháp tách chiết RNA tổng số bao gồm các bước cơ bản giống như tách chiết DNA. Tế bào hoặc mô được nghiền trong dung dịch có chứa chất tẩy mạnh là SDS sodium dodecyl sulphate sarcocyl ở nồng độ cao các dung dịch muối mạnh guanidinium thiocyanate-GTC để hòa tan RNA và kết tủa các protein bị biến tính ở cùng một thời gian và một chất khử ịì-mercaptoethanol . Hai loại chất sau có tác dụng ức chế các RNase nội bào và tách các protein liên kết khỏi phân tử RNA. Bên cạnh đó có thể bổ sung các protease chẳng hạn protease K để gây biến tính các thành phần protein của phức chất RNA-protein. Các protein được loại bỏ khỏi mẫu bằng cách chiết ly tâm với phenol phenol chloroform và chloroform. RNA hòa tan trong pha nước được kết tủa bằng ethanol hoặc isopropanol và được thu nhận lại qua ly tâm. RNA được bảo quản trên một năm ở -70 c trong nước có chứa l m nhân tố ức che RNase . . Phân lập RNA poly A RNA tổng số của tế bào chứa khoảng 90-99 rRNA và tRNA trong đó rRNA chiếm khoảng 80-85 và tRNA chiếm khoảng 15-20 . Các RNA này có kích thước và trình tự xác định và có thể được tách riêng dễ dàng bằng điện di hoặc ly tâm. Riêng mRNA chỉ chiếm khoảng 1-5 RNA tổng Công nghệ DNA tái tổ hợp 129 số của tế bào lại có kích thước và trình tự rất đa dạng. Tuy nhiên chúng có một điểm chung là cấu trúc đuôi polyA có thể lên tới 100A . Dựa vào cấu trúc này và đặc .

• Sinh học
• công nghệ sinh học
• công nghệ DNA
• DNA tái tổ hợp
• kỹ thuật di truyền
• kỹ thuật gen
• Bài giảng Công nghệ sinh học
• Ứng dụng của công nghệ sinh học
• Phương pháp công nghệ sinh học
• Công nghệ sinh học động vật
• Công nghệ sinh học người
• Công nghệ sinh học y sinh
• Sinh học phân tử
• Sinh học tế bào
• Vai trò của công nghệ sinh học
• Sự phát triển của sinh học phân tử
• Cơ sở của công nghệ sinh học
• Giáo trình Công nghệ sinh học
• Tài liệu Công nghệ sinh học
• Nhập môn công nghệ Sinh học
• Công nghệ sinh học phân tử
• Công nghệ sinh học vi sinh vật
• Công nghệ sinh học thực vật
• Công nghệ sinh học môi trường
• Bài giảng Công nghệ sinh học môi trường
• Công nghệ sinh học môi trường chương 7
• Công nghệ sinh học trong nông nghiệp
• Khoa học tự nhiên
• Đề cương môn học
• Định nghĩa công nghệ sinh học
• Lịch sử công nghệ sinh học
• Kinh tế công nghệ sinh học
• Pháp lý công nghệ sinh học
• Công nghệ sinh học y tế
• Công nghệ sinh học nông nghiệp
• Đề cương Công nghệ sinh học
• Ôn tập Công nghệ sinh học
• Ôn thi Công nghệ sinh học
• Bài tập Công nghệ sinh học
• Kiến thức Công nghệ sinh học
• Chẩn đoán phân tử
• công nghệ thực phẩm
• phản ứng khuếch đại gen
• nghiên cứu Công nghệ sinh học
• thiết bị công nghệ sinh học
• sinh học
• Công nghệ sinh học môi trường chương 5
• Chất đốt sinh học
• Năng lượng và chất đốt sinh học
• Sinh học môi trường
• Công nghệ sinh học môi trường chương 3
• Công nghệ sạch
• Chất thải sinh hoạt
• Bài giảng Công nghệ sinh học thực phẩm
• Công nghệ sinh học thực phẩm
• Tài liệu Công nghệ sinh học thực phẩm
• Tìm hiểu công nghệ sinh học thực phẩm