Đang chuẩn bị nút TẢI XUỐNG, xin hãy chờ
Tải xuống
Chương 4 CHƯƠNG 4: THAO TÁC VỚI DNA TINH KHIẾT Trước hết, chuẩn bị mẫu DNA tinh khiết.Bước tiếp theo trong một thí nghiệm tách dòng gen là xây dựng phân tử DNA tái tổ hợp.Để tạo ra phân tử tái tổ hợp này, vector cũng như DNA được tạo dòng, phải được cắt tại những điểm riêng biệt và sau đó nối lại với nhau một cách có kiểm soát.Cắt và nối là hai vídụ về kĩ thuật thao tác DNA, gồm nhiều kỹ thuật đã được phát triển trên nhiều năm qua.Khi được cắt và nối, phân tử DNA có. | Chương 4 CHƯƠNG 4 THAO TÁC VỚI DNA TINH KHIẾT Trước hết chuẩn bị mẫu DNA tinh khiết.Bước tiếp theo trong một thí nghiệm tách dòng gen là xây dựng phân tử DNA tái tổ hợp.Để tạo ra phân tử tái tổ hợp này vector cũng như DNA được tạo dòng phải được cắt tại những điểm riêng biệt và sau đó nối lại với nhau một cách có kiểm soát.Cắt và nối là hai vídụ về kĩ thuật thao tác DNA gồm nhiều kỹ thuật đã được phát triển trên nhiều năm qua.Khi được cắt và nối phân tử DNA có thể ngắn lại dài ra sao chép thành RNA hoặc thành phân tử DNA mới và được sửa chữa bằng việc thêm vào hoặc lấy đi những nhóm hóa học đặc biệt.Tất cả những thao tác này có thể được thực hiên trong một ống nghiệm ngoài việc cung cấp nền tảng cho tách dòng gen nó còn sử dụng cho những nghiên cứu cơ bản trong sinh hóa học DNA cấu trúc gen và kiểm soát biểu hiện gen. Hầu hết các kỹ thuật thao tác DNA đều sử dụng enzyme tinh khiết. Các enzyme này tham gia vào các quá trình thiết yếu bên trong tế bào như sao chép DNA và dịch mã phá vỡ các phân tử DNA không mong muốn hoặc DNA ngoại lai ví dụ DNA virú xâm nhập vào sửa chữa các DNA bị biến đổi và tái tổ hợp recombination giữa các DNA khác nhau.Sau khi được tinh sạch từ tế bào các enzyme này có khả năng thực hiện những phản ứng tự nhiên sẵn có của chúng hoặc những phản ứng có quan hệ gần gũi với chúng trong điều kiện nhân tạo.Mặc dù những phản ứng enzyme này khá dễ hiểu nhưng khi thực hiện chúng không thể xảy ra hoàn toàn như các phương pháp hóa học chuẩn.Vì vậy những enzyme này giữ vai trò quyết định trong kỹ thuật di truyền và một ngành công nghiệp quan trọng xuất hiện làm công việc chuẩn bị enzyme mô tả đặc tính enzyme và tiếp thị chúng.Các công ty điều chế enzyme tinh khiết cao đã cung cấp cho các nhà sinh học phân tử các nhu cầu cần thiết Thao tác cắt và nối trong tách dòng gen được thực hiện bởi những enzyme được gọi là restriction enzyme dùng để cắt và ligase để nối .Trong chương này hầu hết sẽ liên quan đến những cách thức sử dụng hai loại enzyme này.Tuy nhiên .
