Đang chuẩn bị nút TẢI XUỐNG, xin hãy chờ
Tải xuống
Thứ hai, phần lớn DNA của eucaryotae bậc cao dư thừa, tức không mã hóa cho việc tổng hợp protein, những đoạn này làm tốn công vô ích khi tạo dòng. Trong thực tiễn của kỹ thuật di truyền, người ta sử dụng rộng rãi phương pháp thứ ba, đó là tạo gen từ các mRNA thông tin của chúng. Phương pháp này dựa vào quá trình phiên mã ngược nhờ sử dụng enzyme phiên mã ngược (reverse transcriptase, có tên là DNA-polymerase phụ thuộc RNA. Enzyme này lần đầu tiên được phát hiện khi nghiên cứu sao chép. | 133 lớn như ở động vật có vú có thể lên đến hàng triệu đoạn và phải cần có hàng triệu dòng vi khuẩn mang các đoạn DNA này trong số đó có những dòng chứa các đoạn DNA tương tự nhau trùng lặp. Thứ hai phần lớn DNA của eucaryotae bậc cao dư thừa tức không mã hóa cho việc tổng hợp protein những đoạn này làm tốn công vô ích khi tạo dòng. Trong thực tiễn của kỹ thuật di truyền người ta sử dụng rộng rãi phương pháp thứ ba đó là tạo gen từ các mRNA thông tin của chúng. Phương pháp này dựa vào quá trình phiên mã ngược nhờ sử dụng enzyme phiên mã ngược reverse transcriptase có tên là DNA-polymerase phụ thuộc RNA. Enzyme này lần đầu tiên được phát hiện khi nghiên cứu sao chép RNA của restovirus gây ung thư. Nó có khả năng tổng hợp nên DNA một mạch được gọi là c-DNA từ khuôn mRNA hoặc từ một đoạn polyribonucleotid tổng hợp hóa học. Nhờ enzyme reverse transcriptase này có thể tổng hợp hầu như tất cả các gen miễm có mặt mRNA của gen đó. Các c-DNA mạch đơn có thể được biến thành mạch kép nhờ DNA-polymerase và được gọi là c-DNA kép. Đoạn c-DNA kép này được gắn vào plasmid và biến nạp vào vi khuẩn để tạo dòng c-DNA. Các dòng DNA của bộ gen là những đoạn ngẫu nhiên của trình tự nucleotid dọc theo DNA của sinh vật và hầu như không phụ thuộc vào loại tế bào nào dùng để lấy DNA. Ngược lại các dòng c-DNA chỉ chứa những đoạn gen đã được phiên mã ra m.RNA vì tế bào của các mô đã được biệt hóa sẽ có các loại mRNA khác nên ngân hàng c-DNA nhận đựoc sẽ phụ thuộc vào kiểu tế bào được sử dụng. Sử dụng ngân hàng c-DNA sẽ có nhiều ưu thế - Thứ nhất các dòng c-DNA chứa trình tự mã hóa liên tục của một gen. - Thứ hai nhiều protein được tổng hợp với số lượng lớn do những tế bào chuyên hóa và như vậy trong các tế bào này mRNA của protein giàu đó sẽ có tỷ lệ cao và ngân hàng c-DNA được tạo ra từ tế bào này sẽ có nhiều c-DNA mã hóa cho các protein tương ứng. Sự dồi dào c-DNA một vài loại nào đó làm giảm nhẹ đáng kể việc xác định đúng dòng mong muốn từ ngân hàng gen. Bằng con đường này đã nhận được và
