Đang chuẩn bị nút TẢI XUỐNG, xin hãy chờ
Tải xuống
Đun sôi hổn hợp trong ống sinh hàn trong 10 giờ. Dung dịch trở thành màu vàng hay xanh lá cây thẫm. Tiếp tục cho thêm: + Liti sulphate LiSO4: 150g + Brom: 5 giọt + Nước cất: 50mL Đun sôi trong 15 phút. Dung dịch thu được có màu vàng sáng. Nếu dung dịch có màu xanh thì phải xử lý với brom lần thứ hai. Sau khi làm nguội thêm nước cất đến 1 lít. Xác định lại nồng độ thuốc thử Folin bằng cách chuẩn độ với NaOH 1N với chỉ thị phenolphtalein. Chứa dung dịch trong. | Giáo Trình Thực Tập Sinh Hóa Đun sôi hổn hợp trong ống sinh hàn trong 10 giờ. Dung dịch trở thành màu vàng hay xanh lá cây thẫm. Tiếp tục cho thêm Liti sulphate LiSO4 150g Brom 5 giọt Nước cất 50mL Đun sôi trong 15 phút. Dung dịch thu được có màu vàng sáng. Nếu dung dịch có màu xanh thì phải xử lý với brom lần thứ hai. Sau khi làm nguội thêm nước cất đến 1 lít. Xác định lại nồng độ thuốc thử Folin bằng cách chuẩn độ với NaOH 1N với chỉ thị phenolphtalein. Chứa dung dịch trong chai nâu bảo quản trong tủ lạnh. Tiến hành a. Chuẩn bị dãy dung dịch protein chuẩn Chuẩn bị dãy dung dịch protein chuẩn có nồng độ tăng dần từ 0 - 200 pg mL từ dung dịch protein gốc BSA 200 pg mL sau đó cho thêm các hoá chất vào 6 ống nghiệm theo bảng sau Ống nghiệm 1 2 3 4 5 6 Nồng độ dung dịch pg mL 0 40 80 120 160 200 Thể tích dd protein chuẩn pL 0 100 200 300 400 500 Thể tích dd NaCl 0 9 pL 500 400 300 200 100 0 Thể tích dung dịch C mL 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 Thuốc thử Folin pL 250 250 250 250 250 250 b. Chuẩn bị dung dịch phân tích Cho vào ống nghiệm - 1000 pL dd dung dịch phân tích Tính toán sao cho nồng độ protein trong dung dịch từ 20 -200 pg mL - 4 mL dung dịch C - 0 5 mL thuốc thử Folin Sau khi chuẩn bị các dung dịch trên lắc đều để yên trong 30. Quan sát dãy dung dịch và đo độ hấp thụ ở bước sóng 750 nm. Vẽ đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc của độ hấp thụ A vào nồng độ dung dịch protein chuẩn. Từ giá trị độ hấp thụ của dung dịch phân tích có thể suy ra nồng độ protein trong mẫu phân tích dựa vào đường chuẩn. 5.6. ĐỊNH LƯỢNG PROTEIN TỔNG SỐ THEO PHƯƠNG PHÁP KJELDAHL Nguyên tắc Khi đun sôi lâu mẫu vật có chứa nitrogen đạm trong H2SO4 đậm đặc với sự hiện diện của chất xúc tác thích hợp thì tất cả các hợp chất hữu cơ bị oxy hóa còn NH3 được giải phóng ra liên kết với H2SO4 tạo thành NH 2SO4. 46 Giáo Trình Thực Tập Sinh Hóa H2SO4 đđ _ _ 2 NH4 2SO4 Xúc tác tO Hợp chất chứa N Ta có thể xác định lượng đạm này khi cho chúng tác dụng với NaOH chúng sẽ được lôi cuốn bằng hơi nước và được cất
