Đang chuẩn bị nút TẢI XUỐNG, xin hãy chờ
Tải xuống
RE tách chiết từ vi khuẩn có thể cắt DNA của tế bào động vật, thực vật, vi khuẩn khác ở cùng vị trí giới hạn hay điểm giới hạn. Số lượng kích thước đoạn cắt dài hay ngắn phụ thuộc vào điểm giới hạn trên phân tử DNA. Enzym giới hạn có khả năng cắt DNA phage ở những vị trí nhất định thành những đoạn ngắn. | 1. ENZYM GIỚI HẠN (restriction enzyme, RE) 1.1. Tên gọi các enzym giới hạn 1.2. Các loại enzym giới hạn 1.3. Các RE loại II 2. MỘT SỐ ENZYM KHÁC THƯỜNG SỬ DỤNG TRONG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ Tế bào vi khuẩn bị phage phá hủy Một số tế bào vi khuẩn không bị phá hủy do DNA của phage đoạn nhỏ Enzym (cắt) phage (thực khuẩn thể) (hiện tượng giới hạn) phage (thực khuẩn thể) Enzym giới hạn (Restriction enzyme, RE) : có khả năng cắt DNA phage ở những vị trí nhất định thành những đoạn ngắn. thuộc nhóm enzym endonuclease, cắt các liên kết phosphodieste trong phân tử DNA. Ví dụ: Hae III cắt DNA ở giữa 4 cặp nucleotid GG CC CC GG Sma I cắt DNA bằng giữa 6 cặp nucleotid CCC CCC GGG GGG EcoR I cắt DNA lệch giữa 6 cặp nucleotid G AATTC CTTAA G Đặc tính của RE: cắt DNA không đặc hiệu loài: RE tách chiết từ vi khuẩn có thể cắt DNA của tế bào động vật, thực vật và vi khuẩn khác ở cùng vị trí giới hạn hay điểm giới hạn. Số lượng và kích thước đoạn cắt dài hay ngắn, tùy thuộc vào số lượng điểm giới hạn trên phân tử DNA. Điều kiện hoạt động : - nhiệt độ - dung dịch đệm thích hợp Các RE hợp thành hệ thống bảo vệ ở tế bào prokaryote. Chưa có hệ thống nào tương đương được phát hiện ở eukaryote. 1.1.Tên gọi các enzym giới hạn Tên Giống Loài Chủng Thứ tự dòng Escherichia coli Ry13 EcoR I E co R I EcoR V E co R V Serratia martesens Sma I S ma I Hemophilus aegypticus Hae III H ae III 3 loại (dựa vào khả năng nhận biết và cắt một trình tự xác định trên phân tử DNA): Loại I nhận biết được trình tự đặc hiệu, cắt cách vị trí giới hạn khoảng 1000-5000 nucleotid cắt tại đó và phóng thích độ vài chục nucleotid. Loại II nhận biết trình tự và cắt ngay vị trí đó. Loại III nhận biết trình tự và cắt DNA ở vị trí cách đó khoảng 20 nucleotid về phía trước. 1.3.1. Trình tự nhận biết Mỗi enzym giới hạn nhận biết và cắt đặc hiệu một đoạn DNA có trình tự từ 4 – 6 cặp nucleotid. Các RE khác nhau có cùng một trình tự nhận biết được gọi là isoschisomers. Đối với một số RE, trình tự nhận biết không có tính . | 1. ENZYM GIỚI HẠN (restriction enzyme, RE) 1.1. Tên gọi các enzym giới hạn 1.2. Các loại enzym giới hạn 1.3. Các RE loại II 2. MỘT SỐ ENZYM KHÁC THƯỜNG SỬ DỤNG TRONG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ Tế bào vi khuẩn bị phage phá hủy Một số tế bào vi khuẩn không bị phá hủy do DNA của phage đoạn nhỏ Enzym (cắt) phage (thực khuẩn thể) (hiện tượng giới hạn) phage (thực khuẩn thể) Enzym giới hạn (Restriction enzyme, RE) : có khả năng cắt DNA phage ở những vị trí nhất định thành những đoạn ngắn. thuộc nhóm enzym endonuclease, cắt các liên kết phosphodieste trong phân tử DNA. Ví dụ: Hae III cắt DNA ở giữa 4 cặp nucleotid GG CC CC GG Sma I cắt DNA bằng giữa 6 cặp nucleotid CCC CCC GGG GGG EcoR I cắt DNA lệch giữa 6 cặp nucleotid G AATTC CTTAA G Đặc tính của RE: cắt DNA không đặc hiệu loài: RE tách chiết từ vi khuẩn có thể cắt DNA của tế bào động vật, thực vật và vi khuẩn khác ở cùng vị trí giới hạn hay điểm giới hạn. Số lượng và kích thước đoạn cắt dài hay ngắn, tùy thuộc vào số lượng điểm giới hạn