Đang chuẩn bị nút TẢI XUỐNG, xin hãy chờ
Tải xuống
Các phương pháp tạo ADN tái tổ hợp Plasmid được tách từ tế bào E. Coli hoặc tế bào nấm men theo phương pháp chiết tách DNA plasmid. Sau đó, dùng enzyme RE II (như EcoRI) cắt để tạo ra plasmid hở có hai đầu lệch nhau. 1. Phương pháp đơn giản dùng đầu lệch - Chọn và xử lí DNA plasmid: Plasmid được tách từ tế bào E. Coli hoặc tế bào nấm men theo phương pháp chiết tách DNA plasmid. Sau đó, dùng enzyme RE II (như EcoRI) cắt để tạo ra plasmid hở có hai đầu lệch. | Các phương pháp tạo ADN tái tô hợp Plasmid được tách từ tế bào E. Coli hoặc tế bào nấm men theo phương pháp chiết tách DNA plasmid. Sau đó dùng enzyme RE II như EcoRI cắt để tạo ra plasmid hở có hai đầu lệch nhau. 1. Phương pháp đơn giản dùng đầu lệch - Chọn và xử lí DNA plasmid Plasmid được tách từ tế bào E. Coli hoặc tế bào nấm men theo phương pháp chiết tách DNA plasmid. Sau đó dùng enzyme RE II như EcoRI cắt để tạo ra plasmid hở có hai đầu lệch nhau. - Chọn và xử lí đoạn cài DNA đoạn cài được thu nhận và lựa chọn tinh chế theo mục đích của từng nghiên cứu. Cắt DNA bằng enzyme RE loại II cùng loại với enzyme cắt plasmid EcoRI để tạo ra các vết cắt giống nhau. - Tạo plasmid tái tổ hợp Ghép đoạn cài vào plasmid bằng cách ủ các DNA đoạn cài với plasmid với sự có mặt của enzyme DNA ligase ta thu được DNA tái tổ hợp. Phản ứng nối xảy ra theo sơ đồ được biểu diễn trên hình. 2. Phương pháp sử dụng đoạn nối linker - Chọn và xử lí vector plasmid tương tự như trên - Chọn và xử lí đoạn cài Linker là những đoạn DNA dài 10 đến 15 nucleotide được tổng hợp bằng phương pháp hóa học sao cho ở giữa mỗi linker phải có trình tự nhận biết bởi một enzyme cắt hạn chế loại II. Ví dụ như EcoRI có chuỗi đích là G AATTC. cDNA đầu bằng được tổng hợp từ mRNA nhờ enzyme sao chép ngược theo cơ chế nuclease S1. Metyl hóa các vùng hạn chế có trong đoạn cDNA sợi đôi được nhận biết bởi enzyme EcoRI. Ủ linker có chứa chuỗi đích G AATTC với cDNA và enzyme DNA ligase để tạo phân tử lai. Cắt phân tử DNA lai bởi enzyme EcoRI ta được phân tử lai có hai đầu lệch. Phương pháp dùng đầu .
