Đang chuẩn bị nút TẢI XUỐNG, xin hãy chờ
Tải xuống
Tham khảo tài liệu 'hộp điện trong công nghệ dna part 14', kỹ thuật - công nghệ, điện - điện tử phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả | 2.1.1. Phương thức Điện di trên polyacrylamide gel với sự có mặt của SDS sodium dodecyl sulfate là kỹ thuật dùng trong hóa sinh di truyền và sinh học phân tử để phân tách các protein theo tính linh động điện di của chúng phụ thuộc vào chiều dài của chuỗi polypeptide hoặc khối lượng phân tử cấu hình xoắn của protein các biến đổi hậu dịch mã và các nhân tố khác . Điện SDS cho phép phân ly các phân tử protein có khối lượng khác nhau. SDS có điện tích âm rất lớn và có khả năng liên kết với mạch peptide để biến tính các cấu trúc bậc hai và bậc ba không liên kết bằng cầu disulfide của protein bằng cách bọc xung quanh khung polypeptide. Như vậy số lượng SDS tương tác với protein tỷ lệ với khối lượng kích thước phân tử protein và điện tích của SDS bám vào có thể làm bất cứ phân tử protein nào cũng chuyển động trong điện trường từ cực âm - sang cực dương . Do đó bằng phương pháp điện di có thể phân tách riêng biệt các phân tử protein có khối lượng phân tử khác nhau. Không có SDS các protein khác nhau có khối lượng phân tử tương tự sẽ dịch chuyển khác nhau do sự khác nhau về cuộn xoắn bởi vì những khác nhau trong các kiểu cuộn xoắn sẽ làm cho một vài phân tử protein thích hợp tốt hơn với khuôn gel so với những phân tử protein khác. Bổ sung SDS giúp giải quyết vấn đề này vì nó làm cho các phân tử protein trở thành mạch thẳng sao cho chúng có thể phân tách hoàn toàn theo khối lượng phân tử cấu trúc sơ cấp hoặc số lượng và kích thước của các amino acid . SDS liên kết với protein theo tỷ lệ khoảng 1 4 g SDS trên 1 0 g protein mặc dù tỷ lệ liên kết có thể thay đổi từ 1 1-2 2 g SDS g protein tạo ra một tỷ lệ khối lượng điện tích thống nhất cho mọi phân tử protein để sự dịch chuyển qua gel chỉ liên quan đến kích thước của protein. Một loại thuốc nhuộm vết có thể được bổ sung vào dung dịch protein cho phép theo dõi tiến độ của dịch chuyển protein qua gel trong suốt quá trình điện di. Hình 2.9. Điện di protein bằng kỹ thuật SDS-PAGE và nhuộm bằng Coomassie blue. WM Chuẩn khối lượng .