Đang chuẩn bị nút TẢI XUỐNG, xin hãy chờ
Tải xuống
Bài giảng "Nhập môn Công nghệ sinh học - Chương 3: Công nghệ DNA tái tổ hợp" cung cấp cho người học các kiến thức: Lịch sử hình thành, quy trình tiến hành, các vector chuyển gene, hệ thống tế bào chủ, kỹ thuật và phương pháp căn bản,. . | 3 3 2015 Công nghệ DNA tái tổ hợp Nguyễn Vũ Phong Lịch sử hình thành 1972 - 1973 DNA tái tổ hợp in vitro từ 3 nguồn vật liệu di truyền khác nhau. Berg Boyer và Cohen 1973 - 1974 DNA tái tổ hợp có hoạt tính sinh học Cohen Henlinski Boyer . Tên gọi Kỹ thuật DNA tái tổ hợp DNA recombinant technology Kỹ thuật gene Gene engineering hay công nghệ gene Genetic technology Thao tác gene Gene manipulation Tạo dòng phân tử Molecular cloning Kỹ thuật di truyền Genetic engineering thao tác với những phần lớn hơn của bộ gene. QUY TRÌNH TIẾN HÀNH Bước 1 Nuôi tế bào chủ và tế bào cho Bước 2 Tách DNA plasmid và DNA tế bào cho Bước 3 Cắt DNA plasmid và DNA mục tiêu bằng 1 loại enzyme cắt giới hạn Bước 4 Trộn và nối 2 loại DNA bằng enzyme nối tạo DNA tái tổ hợp hoàn chỉnh Bước 5 Chuyển DNA tái tổ hợp vào tế bào nhận E. coli nấm men Bước 6 Chọn lọc và nhân dòng tế bào mang gene tái tổ hợp Bước 7 Nghiên cứu điều kiện để gene biểu hiện ra sản phẩm Chromosomal DNA -i-agment ToB Clonec hl imiJiiI I li DNA Molecule 1. Enzyme 1.1. Restriction endonuclease enzyme RE - Trình tự nhận biết gồm 4-6 cặp nu đối xứng đảo ngược palindrom - Cắt tạo thành đầu so le sticky end hay đầu bằng cohesive end . Khoảng 3000 RE với 230 trình tự nhận biết khác nhau. EcoRI Escherichia coli R dòng vi khuẩn I thứ tự tìm ra I đầutiên 1. Enzyme 1.1. Enzyme cắt giới hạn Restriction endonuclease enzyme RE - 1962 hạn chế sự sinh sản của phage trong tế bào vi khuẩn - Hệ thống hạn chế - biến đổi restriction - modification system giúp bảo vệ tế bào khỏi sự xâm nhập của DNA lạ. Restriction enzyme.swf 1 3 3 2015 1. Enzyme 1.3. Enzyme phiên mã ngược reverse transcriptase Tổng hợp sợi DNA bổ sung c-DNA complementary DNA từ một sợi mRNA hoặc từ polyribonucleotide tổng hợp c-DNA có thể tổng hợp thành c-DNA kép c-DNA duplex nhờ DNA polymerase. c-DNA kép được dùng trong việc tạo dòng c-DNA cDNA.swf 1. Enzyme 1.4. Các enzyme khác Enzyme Chức năng DNaseI Phân hủy DNA mạch kép bằng phản ứng thủy phân nội liên kết phosphodiester .
