Đang chuẩn bị nút TẢI XUỐNG, xin hãy chờ
Tải xuống
Điện di là kỹ thuật được sử dụng trong thí nghiệm để phân để phân tích các đại phân tử tích điện. Trong phòng thí nghiệm sinh học phân tử người ta thường sử dụng phương pháp điện di để tách ly, phát hiện phân tử DNA nguyên vẹn, DNA bị cắt hạn chế và DNA của sản phẩm PCR. Axit nucleic nói chung là một phân tử tích điện âm, vì vậy, chúng có thể dịch chuyển qua bảng gel từ cực âm (cathode) sang cực dương (anode) dưới tác dụng của điện trường. . | Phương pháp điện di DNA Nguyên tắc điện di Điện di là kỹ thuật được sử dụng trong thí nghiệm để phân để phân tích các đại phân tử tích điện. Trong phòng thí nghiệm sinh học phân tử người ta thường sử dụng phương pháp điện di để tách ly phát hiện phân tử DNA nguyên vẹn DNA bị cắt hạn chế và DNA của sản phẩm PCR. Axit nucleic nói chung là một phân tử tích điện âm vì vậy chúng có thể dịch chuyển qua bảng gel từ cực âm cathode sang cực dương anode dưới tác dụng của điện trường. Trên cùng một bản gel có cùng một dòng điện những phân tử DNA khác nhau về trọng lượng nên khác nhau về điện tích và chạy được những quãng đường khác nhau sau một thời gian như nhau. Sau khi phân tách bằng điện di để phát hiện phân tử DNA người ta dùng phương pháp làm hiện hình. Đối với gel agarose người ta nhuộm bằng ethidium bromid. Chất này sẽ gắn xen các bazơ của phân tử DNA và phát quang dưới tia tử ngoại. Như vậy dễ dàng cho phép phát hiện vị trí các đoạn DNA trên gel và có thể phân biệt được phân tử DNA trên cùng một bảng gel. Đối với gel polyacrylamid các phân tử thường được đánh dấu bằng đồng vị phóng xạ và vị trí của chúng sẽ được phát hiện bằng kỹ thuật phóng xạ tự ghi. Trong điện di người ta sử dụng thang DNA chuẩn thường là DNA X. Khi điện di cho chạy cùng với mẫu nghiên cứu qua đó có thể so sánh với DNA mẫu với DNA chuẩn để biết trọng lưọng phân tử hoặc trích li được DNA khác nhau. Cách tiến hành Hệ thống điện di bao gồm nguồn điện buồng điện di khuôn đổ gel và hệ thống soi chụp ảnh. Các bước được tiến hành như sau - Cân khoảng 1g agarose cho vào 100ml đệm TBE Tris-borate-EDTA hoặc TAE Tris-acetate-EDTA ở nhiệt độ phòng khuấy đều và để yên 1 phút cho vào lò viba làm nóng chảy gel và không tạo bọt . - Làm nguội gel xuống 50 55 C thêm 1pl ethidium bromid đổ gel vào khuôn gel và lắp lược. - Khi gel nguội đặt khuôn gel vào buồng điện di tháo lược và đổ đệm chạy vào khay gel sao cho đệm cao hơn mặt gel khoảng 2 5 mm. - Nạp DNA mẫu và DNA chuẩn vào các giếng đậy nắp và cắm điện cực. - .
