Đang chuẩn bị nút TẢI XUỐNG, xin hãy chờ
Tải xuống
Trichoderma .harzianumcủa nƣớc ngoài đƣợc dùng làm mẫu đối chứng) Dựa vào thang ladder, cho thấy các dòng nấm Trichoderma chạy với primer ITS4 - ITS5 có kích thƣớc khoảng 670 bp. Tƣơng tự với primer ElongR - ElongF so sánh với ladder thì kích thƣớc vùng elong khoảng 260 bp. Primer là đoạn mồi có tính đặc hiệu khác với tính ngẫu nhiên do primer ITS4 ITS5 thực hiện trên vùng ITS1 – 5,8S – ITS2. | 42 4.4 Kết quả khuếch đại vùng ITS1 - 5 8S - ITS2 Hình 4.4 Sản J hẩm PCR khi khuếch đại bằng cặp primer ITS4 iTs5. Hình 4.3 Sản Jihan PCR khi khuếch đại bằng cặp primer Elong R-Elong F. Với 1 1 T4 2 2 T6 3 3 T19 4 4 L35.5 5 GJS 00-39 dòng Trichoderma .harzianumcủa nước ngoài được dùng làm mẫu đối chứng Dựa vào thang ladder cho thấy các dòng nấm Trichoderma chạy với primer ITS4 - ITS5 có kích thước khoảng 670 bp. Tương tự với primer ElongR - ElongF so sánh với ladder thì kích thước vùng elong khoảng 260 bp. Primer là đoạn mồi có tính đặc hiệu khác với tính ngẫu nhiên do primer ITS4 -ITS5 thực hiện trên vùng ITS1 - 5 8S - ITS2. Nếu quá trình ly trích tốt ít DNA bị đứt gãy không bị tạp sản phẩm DNA trước khi chạy PCR cần tinh sạch thì kết quả PCR tốt hơn. Cần phải tinh sạch sản phẩm PCR vì theo nguyên tắc và thực nghiệm thì trong ống eppendorf chứa hàng triệu DNA được nhân lên nhờ vào quá trình khuếch đại thì vẫn còn sót lại lượng hoá chất cần để chạy PCR cũng như lượng DNA đứt gãy có lẫn trong lượng DNA mẫu ban đầu. Do đó cần phải tinh sạch sản phẩm PCR trước khi đọc trình tự DNA. 43 Sau khi tinh sạch sản phẩm PCR. Chuẩn bị pha loãng để có thể đọc trình tự DNA vùng ITS1 - 5 8S - ITS2 và vùng Tef. 4.5 Sản phẩm PCR tinh sạch của dòng Trichoderma harzianum Trong số các sản phẩm PCR đuợc khuếch đại chọn lấy dòng Trichoderma harzianum T4 . Band 1 sản phẩm PCR khuếch đại với cặp primer Elong R và ElongF. Band 2 sản phẩm PCR khuếch đại với cặp primer ITS 4 và ITS 5 của cùng dòng nấm Trichoderma harzianum. Pha loãng sản phẩm PCR làm ở mức độ 2 4 6 lần. Độ pha loãng 4 có thể sử dụng để tiến hành đọc trình tự vùng gene cần thiết. Band 1 Với cặp primer ElongR - ElongF Band 2 Với cặp primer ITS4 - ITS5 Hình 4.5 Sản phẩm PCR được tinh sạch trước khi đọc trình tự DNA. 4.6 Kết quả giải trình tự vùng ITS-rDNA và vùng Tef 4.6.1 So sánh trình tự nucleotid giữa vùng ITS - rDNA và vùng Tef Sản phẩm khuếch đại vùng bảo tồn ITS - rDNA và vùng chức năng Tef của dòng nấm Trichorderma đuợc .
