Đang chuẩn bị nút TẢI XUỐNG, xin hãy chờ
Tải xuống
PCR (POLYMERASE CHAIN REACTION) CÁC THÀNH PHẦN CỦA PHẢN ỨNG PCR 1. Primer (mồi) Mồi phải thỏa một số điều kiện cơ bản : (1) dài khoảng 18-24 base, (2) Tm của 2 primer gần nhau, (3) [G:G] 40-60%, (4) không hình thành primer dimer, (5) không phải là trình tự lặp lại. 2. DNA bản mẫu (template) Hàm lượng đủ nhưng không quá cao, tinh sạch – không chứa các chất ức chế phản ứng (SDS, chất ức chế từ mẫu (hemoglobin, sắc tố, ), heparin, ) 3. Nồng độ MgCl2 Cần cho hoạt động của Taq polymerase ; hàm lượng. | PCR POLYMERASE CHAIN REACTION CAC THÀNH PHAN CUA PHAN ỨNG PCR 1. Primer moi Moi phai thoa một so điều kiện cơ ban 1 dài khoang 18-24 base 2 Tm cua 2 primer gan nhau 3 G G 40-60 4 khong hình thanh primer dimer 5 khong phai la trình tự lap lai. 2. DNA ban mau template Ham lựợng đu nhựng khong qua cao tinh sach - khong chứa cac chat ực che phan ứng SDS chat ức che từ mau hemoglobin sac to . heparin . 3. Nong đo MgCl2 Can cho hoat đọng cua Taq polymerase ham lựợng qua cao se tao nhieu san pham ky sinh qua thap thì lam giam hieu qua nhan ban cua enzyme 4. dNTP Thanh phan 4 loai dNTP phai can bang ham lựợng thựơng khong đoi nhựng co the thay đoi tuy đieu kiên thực te CÁC THÀNH PHAN CUA PHAN ỨNG PCR tiep 5. Enzyme Được chon tuy muc đích sử dung Taq DNA polymerase Thermus aquaticus thong dung nhat hoat tính polymerase kha manh 35-100 nu giay co hoat tính 5 3 exonuclease Stoffel DNA polymerase tính chịu nhiet cao hôn khong co hoat tính 5 -3 exonuclease hoat động được ợ pho MgCl2 rộng - multiplex PCR Taq va Stoffel DNA polymerase them 1 3 dA vao san pham PCR Vent DeepVent DNA polymerase Thermococcus litoraliS tính chịu nhiet rat cao nhan ban được những đoan DNA rat dai co hoat tính 3 -5 exonuclease - tính trung thực cao hôn Taq pol 5-15 lan tao san pham đau bang Pfu DNA polymerase Pyrococcus furiosuS co ca 2 hoat tính 5 -3 va 3 -5 exonuclease tính trung thực cao hôn Taq pol 12 lan thượng dung trong cycle sequencing Tth DNA polymerase Thermus thermophilus vừa co chức nang polymerase vừa co chức nang phien ma ngược RT dung trong phan ưng RT-PCR UlTma DNA polymerase Thermotoga maritime tính chịu nhiet rat cao co hoat tính 3 -5 exonuclease tính trung thực rat .
