Đang chuẩn bị liên kết để tải về tài liệu:
Nghiên cứu tạo kháng thể đơn chuỗi đặc hiệu kháng nguyên Ompa của vi khuẩn gây bệnh vàng lá gân xanh trên cây có múi

Trong nghiên cứu này, với mục đích sản xuất kháng thể đơn chuỗi kháng kháng nguyên Ompa của vi khuẩn CLas, đầu tiên, chúng tôi sử dụng thư viện kháng thể nanobody (single variable domain, VHH) của Lạc đà để sàng lọc các kháng thể đơn chuỗi VHH kháng kháng nguyên Ompa bằng kỹ thuật bộc lộ phage M13 (phage-display). | Tạp chí Công nghệ Sinh học 18 3 529-541 2020 NGHIÊN CỨU TẠO KHÁNG THỂ ĐƠN CHUỖI ĐẶC HIỆU KHÁNG NGUYÊN OMPA CỦA VI KHUẨN GÂY BỆNH VÀNG LÁ GÂN XANH TRÊN CÂY CÓ MÚI Hồ Thị Thương1 Nguyễn Thị Thơm1 Nguyễn Thị Trà1 Trịnh Thái Vy1 Phạm Bích Ngọc1 Lê Văn Sơn1 Nguyễn Thị Bích Ngọc2 Chu Hoàng Hà1 1 Viện Công nghệ sinh học Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam 2 Viện Bảo vệ Thực vật Viện Khoa học nông nghiệp Việt Nam Người chịu trách nhiệm liên lạc. E-mail chuhoangha@ibt.ac.vn Ngày nhận bài 08.11.2019 Ngày nhận đăng 20.02.2020 TÓM TẮT Bệnh vàng lá gân xanh hay còn gọi là HuangLongbing HLB được xem là một trong những bệnh hại nguy hiểm nhất trên cây ăn quả có múi. Bệnh làm hạn chế việc sản xuất cây ăn quả có múi ở khắp nơi trên thế giới. Phương pháp sản xuất kháng thể kháng protein Ompa của vi khuẩn Candidatus Liberibacter asiaticus CLas để phát hiện bệnh vàng lá gân xanh đang được xem là hướng nghiên cứu triển vọng. Trong nghiên cứu này với mục đích sản xuất kháng thể đơn chuỗi kháng kháng nguyên Ompa của vi khuẩn CLas đầu tiên chúng tôi sử dụng thư viện kháng thể nanobody single variable domain VHH của Lạc đà để sàng lọc các kháng thể đơn chuỗi VHH kháng kháng nguyên Ompa bằng kỹ thuật bộc lộ phage M13 phage-display . Tiếp đến các dòng phage đơn 21 33 53 56 59 cho kết quả ELISA cao với kháng nguyên Ompa được lựa chọn để tách phagemid và đoạn gen mã hóa các kháng thể VHH được giải trình tự. Đoạn gen mã hóa cho kháng thể 53-VHH có ái lực với Ompa tốt nhất được lựa chọn và chèn vào vector biểu hiện pET-21a sau đó nhân dòng trong chủng E. coli DH5α và biểu hiện trong chủng BL21 DE3 . Kháng thể đơn chuỗi 53-VHH kháng Ompa được tối ưu sự biểu hiện ở các nhiệt độ khác nhau 37 oC 28 oC và 15 oC với nồng độ cảm ứng IPTG 0 1 M. Kháng thể 53-VHH kháng Ompa được tinh sạch thành công dưới điều kiện biến tính sau đó tái cuộn gấp. Hoạt tính sinh học của kháng thể đơn chuỗi 53-VHH kháng kháng nguyên Ompa được đánh giá bằng phản