Đang chuẩn bị nút TẢI XUỐNG, xin hãy chờ
Tải xuống
Bài viết này trình bày về một qui trình đơn giản để biểu hiện và tinh sạch ADN polymerase tái tổ hợp có nguồn gốc từ vi khuẩn ưa nhiệt Thermus aquaticus và thử nghiệm chế phẩm “hotstart”. | TAP CHI 2015, 37(1): 124-132 Quy trình ñơnSINH giản HOC sản xuất ADN polymerase DOI: 10.15625/0866-7160/v37n1.6305 QUY TRÌNH ĐƠN GIẢN SẢN XUẤT ADN POLYMERASE VÀ CHẾ PHẨM ‘HOTSTART’ Ở QUI MÔ PHÒNG THÍ NGHIỆM Vũ Tuấn Nam1, Chong Chom-Kyu2, Lê Tiến Dũng1* 1 Viện Di truyền Nông nghiệp, Viện Khoa học và Nông nghiệp Việt Nam, *research@letiendung.info 2 Công ty TNHH Genbody, Cheonan, Hàn Quốc TÓM TẮT: Phản ứng nối kết chuỗi các phân tử nucleotide hay còn gọi là PCR (Polymerase Chain Reaction) sử dụng enzyme ADN polymerase và các thành phần khác ñể khuếch ñại ñoạn ADN mục tiêu, trong ñó enzyme ADN polymerase ñóng vai trò then chốt. Vector mang gen mã hóa cho ADN polymerase từ vi khuẩn ưa nhiệt Thermus aquaticus ñược biến nạp vào tế bào Escherichia coli ñể biểu hiện enzyme này. Taq ADN polymerase tái tổ hợp ñược tinh sạch theo quy trình ñơn giản, dễ thực hiện gồm các bước phá tế bào bằng sóng siêu âm, ly tâm lấy dịch chiết, xử lý nhiệt, kết tủa bằng ammonium sulphate và thẩm tích qua ñêm. Enzyme thu ñược có ñộ sạch cao khi kiểm tra bằng ñiện di protein và có họat tính tương ñương với enzyme thương mại khi so sánh bằng phản ứng khuyếch ñại ADN. Cứ mỗi 500 mL môi trường kết hợp nuôi cấy lắc chúng tôi thu ñược 2,02,5 ml enzyme có họat tính tương ñương với 7.000-8.000 ñơn vị Taq ADN polymerase thương mại có giá trị tương ñương với sản phẩm nhập khẩu khoảng 30 triệu ñồng. Thử nghiệm tạo chế phẩm “hotstart” enzyme chúng tôi thấy tỉ lệ pha trộn 100 : 1 (nanogram kháng thể : ñơn vị Taq) có khả năng ngăn chặn sự hình thành các băng ADN không ñặc hiệu. Enzyme thu ñược cho thấy có thể thích ứng với phản ứng PCR có ADN khuôn có ñộ phức tạp khác nhau như ADN genome, ADN plasmid hay ADN bổ sung (cDNA). Quy trình này có thể nhân rộng ñể tự sản xuất Taq ADN polymerase sử dụng trong phòng thí nghiệm. Từ khóa: enzyme tái tổ hợp, hotstart Taq ADN polymerase, Taq ADN polymerase, protein tái tổ hợp. MỞ ĐẦU PCR (còn gọi là phản ứng nối kết chuỗi các phân tử nucleotide) là phương pháp .