TAILIEUCHUNG - Thí nghiệm nuôi cấy mô và tế bào thực vật - Bài 7

Chuyển gen thông qua Agrobacterium tumefaciens I. Mục đích và yêu cầu Các thực vật chuyển gen đã được tạo ra bằng nhiều kỹ thuật khác nhau. Có hai phương thức chính: - Chuyển gen trực tiếp: bắn gen, xung điện, vi tiêm, siêu âm, silicon carbide, thông qua ống phấn, điện di . - Chuyển gen gián tiếp (nhờ vi sinh vật): Agrobacterium tumefaciens. Phương pháp được sử dụng thông dụng và ít tốn kém hơn cả là chuyển gen gián tiếp thông qua Agrobacterium. . | 185 Bài 7 Chuyển gen thông qua Agrobacterium tumefaciens I. Mục đích và yêu cầu Các thực vật chuyển gen đã được tạo ra bằng nhiều kỹ thuật khác nhau. Có hai phương thức chính - Chuyển gen trực tiếp bắn gen xung điện vi tiêm siêu âm silicon carbide thông qua ống phấn điện di . - Chuyển gen gián tiếp nhờ vi sinh vật Agrobacterium tumefaciens. Phương pháp được sử dụng thông dụng và ít tốn kém hơn cả là chuyển gen gián tiếp thông qua Agrobacterium. Agrobacterium tumefaciens là một loài vi khuẩn Gram âm có trong đất thường được sử dụng để tiến hành biến nạp di truyền trên đối tượng thực vật. Đoạn DNA muốn chuyển vào một cây nào đó có thể được thao tác dễ dàng trên E. coli và sau đó chuyển trở lại vào Agrobacterium. Việc chuyển gen vào thực vật qua Agrobacterium đã thực hiện thành công trên nhiều loại cây thuốc lá đậu tương các cây họ đậu nhiệt đới bông cải khoai tây. II. Dụng cụ thiết bị hóa chất 1. Dụng cụ - Bình tam giác 250 mL ống nghiệm có nắp vặn - Giấy thấm vô trùng - Forceps kéo dao mổ - Que cấy vi sinh - Đĩa petri plastic và thủy tinh vô trùng - Giấy parafilm - Giấy nhôm - Tube eppendorf 1 5-2 mL - Cốc chịu nhiệt ống đong micropipette 2. Thiết bị - Nồi khử trùng 186 - Tủ sấy - Laminar - Tủ lạnh - Micro wave - Cân phân tích 10-4g - Cân kỹ thuật 10-2g - Máy cất nước 2 lần - Máy ly tâm lạnh 14000 rpm cho tube 1 5-2 mL 3. Hóa chất - Môi trường cơ bản MS - Môi trường nuôi cấy vi khuẩn LB - Các loại kháng sinh kanamycin rifampicin và cefotaxim - Agar - MgSO4 10mM - Dung dịch stock các chất kích thích sinh trưởng NAA và BAP - Cồn 90 - Nước cất vô trùng III. Phương pháp tiến hành 1. Nguyên liệu - E. coli chủng TOP 10 có mang pRK 2013 helper plasmid - E. coli chủng TOP 10 có mang vector pBI 121 insert DNA gen ngoại lai mang tính trạng mong muốn - Agrobacterium tumenfaciens chủng LBA 4404. - Cây thuốc lá in vitro. 2. Chuẩn bị môi trường . Môi trường LB - Bacto-tryptone 3 g - Yeast-Extract 1 5 g - NaCl 3 g - Nước cất đến đủ 300mL. 187 . Môi trường LB đặc Môi trường .

TÀI LIỆU LIÊN QUAN
TỪ KHÓA LIÊN QUAN
TAILIEUCHUNG - Chia sẻ tài liệu không giới hạn
Địa chỉ : 444 Hoang Hoa Tham, Hanoi, Viet Nam
Website : tailieuchung.com
Email : tailieuchung20@gmail.com
Tailieuchung.com là thư viện tài liệu trực tuyến, nơi chia sẽ trao đổi hàng triệu tài liệu như luận văn đồ án, sách, giáo trình, đề thi.
Chúng tôi không chịu trách nhiệm liên quan đến các vấn đề bản quyền nội dung tài liệu được thành viên tự nguyện đăng tải lên, nếu phát hiện thấy tài liệu xấu hoặc tài liệu có bản quyền xin hãy email cho chúng tôi.
Đã phát hiện trình chặn quảng cáo AdBlock
Trang web này phụ thuộc vào doanh thu từ số lần hiển thị quảng cáo để tồn tại. Vui lòng tắt trình chặn quảng cáo của bạn hoặc tạm dừng tính năng chặn quảng cáo cho trang web này.