TAILIEUCHUNG - Báo cáo thực hành Kỹ thuật di truyền và Sinh học phân tử

Báo cáo thực hành Kỹ thuật di truyền và Sinh học phân tử gồm các báo cáo về: Bài 1 Tách chiết DNa tổng số từ , Xác định nồng độ DNA bằng quang phổ kế, Bài 3 Điện di trong Gel Agrose, bài 4 Kĩ thuật PCR, Bài 5 Tinh sạch sản phẩm PCR, Bài 6 Cắt DNA bằng Enzyme giới hạn. | ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM BÁO CÁO THỰC HÀNH KỸ THUẬT DI TRUYỀN VÀ SINH HỌC PHÂN TỬ Nhóm 1 Giảng viên TS. Nguyễn Huy Thuần Họ và tên sinh viên Đỗ Thị Hào MSSV DTN1153150024 Lớp 43 CNSH Khoa CNSH CNTP Thái Nguyên 2013 1 Bài 1 TÁCH CHIẾT DNA TỔNG SỐ TỪ E. COLI I. MỤC ĐÍCH THÍ NGHIỆM Mục đích Tách chiết DNA tổng số nhằm mục đích thu nhận DNA ra khỏi cấu trúc bao bọc của tế bào để phục vụ cho các nghiên cứu và ứng dụng sinh học phân tử. Điều quan tâm là thu nhận được các phân tử DNA ở trạng thái nguyên vẹn không bị phân hủy. Cách pha hóa chất. - Dung dịch đệm CTAB CTAB hexadecyltrimethylammonium bromide 2g Tris-HCl pH8 1 5756 g EDTA 0 58448 g NaCl 8 14 g H2O 100 ml 0-mercaptoethanol 0 2 ml chỉ bổ sung ngay trước khi sử dụng 2 Dung dịch đệm CTAB có tác dụng phá màng tế bào bào quan giải phóng ra DNA. EDTA có tác dụng ức chế hoạt động của enzyme DNase bảo vệ DNA phá vỡ liên kết hóa trị II và do đó làm giảm tính bền vững của lớp màng ngoài tế bào vi khuẩn. - Dung dịch CIAA 24 ml chloroform 1 ml isoamylalcohol Chloroform không tan trong nước do đó khi bổ sung vào dịch nuôi tế bào sẽ làm cho dịch này phân thành 2 lớp pha . Hỗn hợp ly tâm mạnh để phân tách lớp. Protein bị kết tủa sẽ nằm ở pha giữa. Isoamylancohol là 1 ancohol với sự có mặt của cation hóa trị I NA K NH4 có tác dụng làm kết tủa DNA. - Dung dịch TE 1x Tris 0 1212 g EDTA 0 03 g H2O 100 ml pH - Cồn 70 cồn tuyệt đối 70 ml H2O 30 ml Sử dụng cồn tuyệt đối để loại bỏ một số muối lẫn tạp trong dung dịch mà chúng kết tủa theo DNA. II. CÁCH TIẾN HÀNH . Nguyên tắc Nguyên tắc tách chiết DNA từ tế bào động vật thực vật và vi khuẩn là như nhau. Tuỳ từng loại mẫu phẩm sinh học tuỳ từng mục đích nghiên cứu và điều kiện phòng thí nghiệm có thể sử dụng các kỹ thuật tách chiết với các loại hoá chất và dung môi khác nhau. Các phương pháp tách chiết DNA thường được dùng gồm 1. Phương pháp CTAB 2. Phương pháp PVP 3. Phương pháp phenol chloroform

TỪ KHÓA LIÊN QUAN
TAILIEUCHUNG - Chia sẻ tài liệu không giới hạn
Địa chỉ : 444 Hoang Hoa Tham, Hanoi, Viet Nam
Website : tailieuchung.com
Email : tailieuchung20@gmail.com
Tailieuchung.com là thư viện tài liệu trực tuyến, nơi chia sẽ trao đổi hàng triệu tài liệu như luận văn đồ án, sách, giáo trình, đề thi.
Chúng tôi không chịu trách nhiệm liên quan đến các vấn đề bản quyền nội dung tài liệu được thành viên tự nguyện đăng tải lên, nếu phát hiện thấy tài liệu xấu hoặc tài liệu có bản quyền xin hãy email cho chúng tôi.
Đã phát hiện trình chặn quảng cáo AdBlock
Trang web này phụ thuộc vào doanh thu từ số lần hiển thị quảng cáo để tồn tại. Vui lòng tắt trình chặn quảng cáo của bạn hoặc tạm dừng tính năng chặn quảng cáo cho trang web này.