TAILIEUCHUNG - Các phương pháp tạo ADN tái tổ hợp

Các phương pháp tạo ADN tái tổ hợp Plasmid được tách từ tế bào E. Coli hoặc tế bào nấm men theo phương pháp chiết tách DNA plasmid. Sau đó, dùng enzyme RE II (như EcoRI) cắt để tạo ra plasmid hở có hai đầu lệch nhau. 1. Phương pháp đơn giản dùng đầu lệch - Chọn và xử lí DNA plasmid: Plasmid được tách từ tế bào E. Coli hoặc tế bào nấm men theo phương pháp chiết tách DNA plasmid. Sau đó, dùng enzyme RE II (như EcoRI) cắt để tạo ra plasmid hở có hai đầu lệch. | Các phương pháp tạo ADN tái tô hợp Plasmid được tách từ tế bào E. Coli hoặc tế bào nấm men theo phương pháp chiết tách DNA plasmid. Sau đó dùng enzyme RE II như EcoRI cắt để tạo ra plasmid hở có hai đầu lệch nhau. 1. Phương pháp đơn giản dùng đầu lệch - Chọn và xử lí DNA plasmid Plasmid được tách từ tế bào E. Coli hoặc tế bào nấm men theo phương pháp chiết tách DNA plasmid. Sau đó dùng enzyme RE II như EcoRI cắt để tạo ra plasmid hở có hai đầu lệch nhau. - Chọn và xử lí đoạn cài DNA đoạn cài được thu nhận và lựa chọn tinh chế theo mục đích của từng nghiên cứu. Cắt DNA bằng enzyme RE loại II cùng loại với enzyme cắt plasmid EcoRI để tạo ra các vết cắt giống nhau. - Tạo plasmid tái tổ hợp Ghép đoạn cài vào plasmid bằng cách ủ các DNA đoạn cài với plasmid với sự có mặt của enzyme DNA ligase ta thu được DNA tái tổ hợp. Phản ứng nối xảy ra theo sơ đồ được biểu diễn trên hình. 2. Phương pháp sử dụng đoạn nối linker - Chọn và xử lí vector plasmid tương tự như trên - Chọn và xử lí đoạn cài Linker là những đoạn DNA dài 10 đến 15 nucleotide được tổng hợp bằng phương pháp hóa học sao cho ở giữa mỗi linker phải có trình tự nhận biết bởi một enzyme cắt hạn chế loại II. Ví dụ như EcoRI có chuỗi đích là G AATTC. cDNA đầu bằng được tổng hợp từ mRNA nhờ enzyme sao chép ngược theo cơ chế nuclease S1. Metyl hóa các vùng hạn chế có trong đoạn cDNA sợi đôi được nhận biết bởi enzyme EcoRI. Ủ linker có chứa chuỗi đích G AATTC với cDNA và enzyme DNA ligase để tạo phân tử lai. Cắt phân tử DNA lai bởi enzyme EcoRI ta được phân tử lai có hai đầu lệch. Phương pháp dùng đầu .

TAILIEUCHUNG - Chia sẻ tài liệu không giới hạn
Địa chỉ : 444 Hoang Hoa Tham, Hanoi, Viet Nam
Website : tailieuchung.com
Email : tailieuchung20@gmail.com
Tailieuchung.com là thư viện tài liệu trực tuyến, nơi chia sẽ trao đổi hàng triệu tài liệu như luận văn đồ án, sách, giáo trình, đề thi.
Chúng tôi không chịu trách nhiệm liên quan đến các vấn đề bản quyền nội dung tài liệu được thành viên tự nguyện đăng tải lên, nếu phát hiện thấy tài liệu xấu hoặc tài liệu có bản quyền xin hãy email cho chúng tôi.
Đã phát hiện trình chặn quảng cáo AdBlock
Trang web này phụ thuộc vào doanh thu từ số lần hiển thị quảng cáo để tồn tại. Vui lòng tắt trình chặn quảng cáo của bạn hoặc tạm dừng tính năng chặn quảng cáo cho trang web này.