TAILIEUCHUNG - Nguyên tắc cơ bản của PCR

Khái quát chung: PCR là phương pháp dùng enzym khuyếch đại chọn lọc một đoạn ADN theo luật số mũ. Phản ứng nhân gene được thực hiện với enzym ADN chịu nhiệt, hai mồi tổng hợp và 4 loại deoxyribonucleic (dATP, dGTP, dCTP và dTTP). Mỗi một chu kỳ phản ứng nhân gene gồm 3 bước (xem hình vẽ minh hoạ): Bước 1 là biến tính ADN, có tác dụng tách hai sợi đơn từ sợi khuôn xoắn kép. Bước 2 là bắt cặp hai mồi vào hai sợi đơn của khuôn. Bước 3 là kéo dài chuỗi theo. | Nguyên tăc cơ bản của PCR Khái quát chung PCR là phương pháp dùng enzym khuyếch đại chọn lọc một đoạn ADN theo luật số mũ. Phản ứng nhân gene được thực hiện với enzym ADN chịu nhiệt hai mồi tổng hợp và 4 loại deoxyribonucleic dATP dGTP dCTP và dTTP . Mỗi một chu kỳ phản ứng nhân gene gồm 3 bước xem hình vẽ minh hoạ Bước 1 là biến tính ADN có tác dụng tách hai sợi đơn từ sợi khuôn xoắn kép. Bước 2 là bắt cặp hai mồi vào hai sợi đơn của khuôn. Bước 3 là kéo dài chuỗi theo mồi chiều 5 -3 với quá trình trùng hợp gắn các dNTP dọc theo sợi khuôn để tạo thành phiên bản mới theo nguyên tắc bổ sung. Tính đặc hiệu của phản ứng được quy định bởi mồi và sự sao chép trực tiếp theo trình tự sợi khuôn giữa hai mồi. Như vậy kết quả tạo ra hàng triệu phiên bản sợi khuôn trong vài giờ. Mồi cho phản ứng là các đoạn ADN có kích thước 20-30 nucleotid được thiết kế theo trình tự của đoạn gene cần khuyếch đại dựa theo dữ liệu có sẵn. Mỗi cặp mồi phải hoàn thành chức năng của mình trong toàn bộ phản ứng tức là chúng phải bám đặc hiệu vào đúng vị trí riêng cho từng mồi. Sở dĩ như vậy là do nếu chúng không bám vào vị trí đặc hiệu thì không thể khuyếch đại được đoạn gene đích. Với các gene có độ bảo thủ cao như rADN thì khi cặp mồi được thiết kế thì chúng có thể nhân được gene từ nhiều đối tượng. Ngược lại trong nhiều trường hợp dùng mồi không đặc hiệu thì có thể nhân được các sản phẩm PCR không đặc hiệu. Tuy nhiên cả hai kết quả trên đều được dùng cho định typ vi sinh vật. Thí nghiệm phản ứng PCR lần đầu tiên dùng mảnh Klenow của enzym ADN polymerase I từ E. coli. Tuy nhiên enzym này bị biến tính tại 94oC và như vậy cần phải bổ sung enzym mới sau mỗi chu kỳ phản ứng. Đến nay quá trình này đã được cải thiện do dùng enzym Taq ADN polymerase Taq Thermus aquaticus chịu nhiệt. Enzym này được tách ra từ vi khuẩn sống ở suối nước nóng. Tốc độ xúc tác cho phản ứng của enzym này rất nhanh có thể đạt khoảng 8000 bp phút tại 755oC. Hoạt tính enzym giảm một nửa khi xử lý tại trong 230 phút hoặc

• Sinh học
• vi sinh vật
• tài liệu vi sinh vật
• nghiên cứu vi sinh vật
• lý thuyết về vi sinh vật
• chuyên ngành vi sinh vật
• Hệ vi sinh vật
• Hệ vi sinh vật trong đất
• Hệ vi sinh vật trong nước
• Hệ vi sinh vật không khí
• Vi sinh vật học
• Vi sinh vật đại cương
• Bài giảng vi sinh vật học chương 5
• Vi sinh vật gây bệnh trong nước
• Bài giảng Vi sinh vật
• Vi sinh vật chỉ thị
• Đặc điểm vi sinh vật chỉ thị
• Phân loại vi sinh vật chỉ thị
• Ý nghĩa vi sinh vật chỉ thị
• Công nghệ vi sinh vật
• Cơ sở vi sinh vật công nghiệp
• Sinh sản của vi sinh vật
• Quá trình sinh lý vi sinh vật
• Sinh lý vi sinh vật
• Lý thuyết vi sinh vật học
• Bài tập vi sinh vật học
• Vi sinh vật học thực phẩm
• Vi sinh vật học công nghiệp
• Sinh thái học vi sinh vật
• Ứng dụng vi sinh vật
• Lý thuyết vi sinh vật
• Vi sinh học
• Bài giảng sinh học
• Ôn tập vi sinh vật học
• Câu hỏi vi sinh vật học
• Bài giảng Vi sinh vật đại cương
• Vi sinh vật nhân nguyên thủy
• Vi sinh nhân thật
• Sinh lý học vi sinh vật
• Di truyền học vi sinh vật
• Vi sinh vật nhân thật
• Vi sinh vật chưa có tế bào
• Vi sinh vật tiền nhân
• Bài giảng vi sinh vật học chương 2
• Bài giảng vi sinh vật học
• Đề tài nghiên cứu Y học
• Bài giảng Thực hành vi sinh vật học
• Thực hành vi sinh vật học
• Phương pháp nuôi cấy vi sinh vật
• Phương pháp tiệt trùng vi sinh vật
• Môi trường nuôi cấy vi sinh vật
• Phương pháp quan sát vi sinh vật
• Vi sinh vật thực phẩm
• Bài giảng Vi sinh vật thực phẩm
• Hình thái vi sinh vật
• Cấu tạo sinh vật
• Vi sinh vật Eukaryot
• Vi sinh vật học đại cương
• Giáo trình Vi sinh vật học đại cương
• Cấu tạo vi sinh vật
• Sinh trưởng của vi sinh vật
• Dinh dưỡng của sinh vật
• Trao đổi chất của vi sinh vật
• Đề tài vi sinh vật
• Nghiên cứu sinh vật học
• Đề tài Vi sinh vật gây bệnh
• Kí sinh trùng trong nước thải sinh hoạt
• Vi sinh vật gây bệnh
• Sinh học tế bào
• Vi sinh vật cơ sở
• Tế bào vi sinh vật
• Đa dạng vi sinh vật
• Vi sinh vật đa dạng ở người
• Công nghệ sinh học vi sinh vật
• Chuyển hóa vật chất vi sinh vật
• Sự phân bố vi sinh vật
• Chất hữu cơ chứa nitơ
• Trao đổi vật chất vi sinh vật
• Oxy hóa không an toàn
• Phân giải đường
• Hô hấp vi sinh vật
• Vi sinh vật lên men
• vai trò vi sinh vật
• Dinh dưỡng vi sinh vật
• Sinh trưởng vi sinh vật
• Bài giảng vi sinh vật học chương 3
• Bài giảng Vi sinh vật học đại cương
• Sinh lý học của vi sinh vật
• Dinh dưỡng của vi sinh vật
• Giáo trình Vi sinh vật học công nghiệp
• Nhóm vi sinh vật
• Di truyền vi sinh vật
• Giáo trình Vi sinh vật học
• Vi sinh vật ứng dụng
• Vi sinh vật ứng dụng trong nông nghiệp
• Thí nghiệm vi sinh vật học thực phẩm
• Thí nghiệm vi sinh vật học
• Phương pháp định lượng vi sinh vật
• Định lượng vi sinh vật
• Tính chất sinh lý vi sinh vật