TAILIEUCHUNG - Một số phương pháp hóa phân loại xạ khuẩn – Phần 1

Chuẩn bị thành tế bào 1. Tế bào ướt (1-2 ml) + 5ml nước cất vô trùng + hạt thủy tinh (loại lớn và nhỏ, đường kính ). Phá tế bào bằng sóng siêu âm trong 1- giờ cho đến khi dung dịch trở nên trong. Chuyển sang ống falcon 50ml. Nếu ngừng công việc ở đây, giữ mẫu ở 4oC. 2. Ly tâm với tốc độ 3000g trong 30 phút. Chuyển dịch trên sang ống ly tâm tốc độ cao (có nắp đậy bên trong). Ly tâm với tốc độ 17000rpm trong 30 phút. Bỏ dịch. | Một số phương pháp hóa phân loại xạ khuẩn - Phần 1 Chuẩn bị thành tế bào 1. Tế bào ướt 1-2 ml 5ml nước cất vô trùng hạt thủy tinh loại lớn và nhỏ đường kính . Phá tế bào bằng sóng siêu âm trong 1- giờ cho đến khi dung dịch trở nên trong. Chuyển sang ống falcon 50ml. Nếu ngừng công việc ở đây giữ mẫu ở 4oC. 2. Ly tâm với tốc độ 3000g trong 30 phút. Chuyển dịch trên sang ống ly tâm tốc độ cao có nắp đậy bên trong . Ly tâm với tốc độ 17000rpm trong 30 phút. Bỏ dịch trên. 3. Thêm 3ml SDS 4 SDS có tác dụng loại lipid và protein . Nếu dừng công việc ở đây giữ mẫu ở nhiệt độ phòng. 4. Giữ ở 100oC trong 40 phút nhớ vặn chặt nắp. 5. Ly tâm với tốc độ 17000 rpm trong 30 phút ở 30oC nếu giữ ở nhiệt độ thấp SDS sẽ bị kết tinh . Loại bỏ dịch trên. 6. Rửa với nước ít nhất 3 lần với điều kiện giống trên 17000rpm 30 phút 7. Nếu cần thiết xử lý bằng RNase và DNase. 8. Đông khô qua đêm. Phân tích thành phần acid amin trong thành tế bào 1. 2-3mg thành tế bào 200pl HCl 4N vặn chặt nắp giữ ở 100oC qua đêm 2. Làm khô bằng hút chân không khoảng 1 ngày 1 đêm 3. Thêm 200 111 nước cất trộn đều chuyển sang ống eppendorf ly tâm với tốc độ 12000 rpm trong 5 phút. Lọc mẫu. 4. Chạy sắc ký bản mỏng TLC - Dung môi Methanol 80ml Nước cất 6N HCl 4ml Pyridine 10ml - Cellulose TLC - Chuẩn 1 pl DAP Ala Gly Glu Lys Mẫu 3-5pl - Nhận biết bằng phun ninhydrin giữ ở 100oC trong 5 phút. Các acid amin sẽ hiện lên dưới dạng các chấm màu tím. Đe lâu các chấm này dần dần biến mất nhưng riêng chấm của DAP sẽ chuyển sang màu vàng. 5. Chuẩn bị mẫu chạy HPLC chuẩn bị cho cả mẫu và chuẩn - 10-20 pl 25nmol mẫu làm khô bằng hút chân không khoảng 2h - Thêm 20 pl Ethanol DW Triethylamine 2 2 1 trộn đều làm khô bằng hút chân không khoảng 2h - Thêm 20 pl Ethanol DW Triethylamine Phenylisothiocyanate 7 1 1 1 trộn đều giữ ở nhiệt độ phòng trong 20 phút làm khô bằng hút chân không khoảng 2h - Thêm dung dịch A dich chạy HPLC lọc mẫu dùng làm mẫu chạy HPLC Điều kiện chạy HPLC - Độ hấp thụ .

• Sinh học
• vi sinh vật
• tài liệu vi sinh vật
• lý thuyết vi sinh vật
• nghiên cứu vi sinh vật
• lý thuyết vi sinh vật
• Hệ vi sinh vật
• Hệ vi sinh vật trong đất
• Hệ vi sinh vật trong nước
• Hệ vi sinh vật không khí
• Vi sinh vật học
• Vi sinh vật đại cương
• Bài giảng vi sinh vật học chương 5
• Vi sinh vật gây bệnh trong nước
• Bài giảng Vi sinh vật
• Vi sinh vật chỉ thị
• Đặc điểm vi sinh vật chỉ thị
• Phân loại vi sinh vật chỉ thị
• Ý nghĩa vi sinh vật chỉ thị
• Công nghệ vi sinh vật
• Cơ sở vi sinh vật công nghiệp
• Sinh sản của vi sinh vật
• Quá trình sinh lý vi sinh vật
• Sinh lý vi sinh vật
• Lý thuyết vi sinh vật học
• Bài tập vi sinh vật học
• Vi sinh vật học thực phẩm
• Vi sinh vật học công nghiệp
• Sinh thái học vi sinh vật
• Ứng dụng vi sinh vật
• Vi sinh học
• Bài giảng sinh học
• Ôn tập vi sinh vật học
• Câu hỏi vi sinh vật học
• Bài giảng Vi sinh vật đại cương
• Vi sinh vật nhân nguyên thủy
• Vi sinh nhân thật
• Sinh lý học vi sinh vật
• Di truyền học vi sinh vật
• Vi sinh vật nhân thật
• Vi sinh vật chưa có tế bào
• Vi sinh vật tiền nhân
• Bài giảng vi sinh vật học chương 2
• Bài giảng vi sinh vật học
• Đề tài nghiên cứu Y học
• Bài giảng Thực hành vi sinh vật học
• Thực hành vi sinh vật học
• Phương pháp nuôi cấy vi sinh vật
• Phương pháp tiệt trùng vi sinh vật
• Môi trường nuôi cấy vi sinh vật
• Phương pháp quan sát vi sinh vật
• Vi sinh vật thực phẩm
• Bài giảng Vi sinh vật thực phẩm
• Hình thái vi sinh vật
• Cấu tạo sinh vật
• Vi sinh vật Eukaryot
• Vi sinh vật học đại cương
• Giáo trình Vi sinh vật học đại cương
• Cấu tạo vi sinh vật
• Sinh trưởng của vi sinh vật
• Dinh dưỡng của sinh vật
• Trao đổi chất của vi sinh vật
• Đề tài vi sinh vật
• Nghiên cứu sinh vật học
• Đề tài Vi sinh vật gây bệnh
• Kí sinh trùng trong nước thải sinh hoạt
• Vi sinh vật gây bệnh
• Sinh học tế bào
• Vi sinh vật cơ sở
• Tế bào vi sinh vật
• Đa dạng vi sinh vật
• Vi sinh vật đa dạng ở người
• Công nghệ sinh học vi sinh vật
• Chuyển hóa vật chất vi sinh vật
• Sự phân bố vi sinh vật
• Chất hữu cơ chứa nitơ
• Trao đổi vật chất vi sinh vật
• Oxy hóa không an toàn
• Phân giải đường
• Hô hấp vi sinh vật
• Vi sinh vật lên men
• vai trò vi sinh vật
• Dinh dưỡng vi sinh vật
• Sinh trưởng vi sinh vật
• Bài giảng vi sinh vật học chương 3
• Bài giảng Vi sinh vật học đại cương
• Sinh lý học của vi sinh vật
• Dinh dưỡng của vi sinh vật
• Giáo trình Vi sinh vật học công nghiệp
• Nhóm vi sinh vật
• Di truyền vi sinh vật
• Giáo trình Vi sinh vật học
• Vi sinh vật ứng dụng
• Vi sinh vật ứng dụng trong nông nghiệp
• Thí nghiệm vi sinh vật học thực phẩm
• Thí nghiệm vi sinh vật học
• Phương pháp định lượng vi sinh vật
• Định lượng vi sinh vật
• Tính chất sinh lý vi sinh vật