TAILIEUCHUNG - Biểu hiện gen mã hóa protein huỳnh quang GFP và DSRED ở chủng nấm sợi Aspergillus oryzae VS1 sử dụng phương pháp chuyển gen nhờ vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens
Aspergillus oryzae là loài nấm sợi, được sử dụng phổ biến trong công nghiệp sản xuất thực phẩm và đồ uống ở nhiều nước châu Á, trong đó có Việt Nam. Khai thác loài vi nấm này để sản xuất các protein tái tổ hợp đã được thực hiện ở một số phòng thí nghiệm trên thế giới. Tuy nhiên, việc chuyển gen vào A. oryzae vẫn chủ yếu sử dụng phương pháp thông qua tế bào trần (protoplast) với quy trình thực hiện phức tạp, chi phí thí nghiệm cao. | TAP CHI HOC 2017, 39(2): 199-209 Biểu hiện genSINH mã hóa protein huỳnh quang gfp DOI: BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA PROTEIN HUỲNH QUANG GFP VÀ DsRed Ở CHỦNG NẤM SỢI Aspergillus oryzae VS1 SỬ DỤNG PHƯƠNG PHÁP CHUYỂN GEN NHỜ VI KHUẨN Agrobacterium tumefaciens Hồ Ngọc Quỳnh1, Nguyễn Thị Khuyến1, Trần Thị Phương1, Trần Văn Tuấn1,2* 1 Phòng Genomic, Phòng thí nghiệm Trọng điểm Công nghệ Enzym và Protein, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội 2 Bộ môn Vi sinh vật học, Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội TÓM TẮT: Aspergillus oryzae là loài nấm sợi, được sử dụng phổ biến trong công nghiệp sản xuất thực phẩm và đồ uống ở nhiều nước châu Á, trong đó có Việt Nam. Khai thác loài vi nấm này để sản xuất các protein tái tổ hợp đã được thực hiện ở một số phòng thí nghiệm trên thế giới. Tuy nhiên, việc chuyển gen vào A. oryzae vẫn chủ yếu sử dụng phương pháp thông qua tế bào trần (protoplast) với quy trình thực hiện phức tạp, chi phí thí nghiệm cao. Gần đây, nhóm nghiên cứu của chúng tôi đã phát triển thành công phương pháp chuyển gen vào A. oryzae nhờ vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens sử dụng chủng A. oryzae AUT1-PlD trợ dưỡng uridine/uracil do Đại học Tokyo, Nhật Bản cung cấp. Để chứng minh phương pháp chuyển gen này cũng hoạt động tốt trên các chủng A. oryzae khác, chúng tôi đã lựa chọn chủng A. oryzae VS1 có nguồn gốc Việt Nam cho việc chuyển gen. Chủng VS1 sinh trưởng nhanh, không sinh độc tố aflatoxin và có khả năng tiết mạnh enzym vào môi trường nuôi cấy. Sử dụng phương pháp chuyển gen nhờ vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens với marker trợ dưỡng pyrG, kết quả cho thấy hiệu suất chuyển gen vào chủng VS1 cao hơn khoảng 100 lần so với chủng A. oryzae AUT1-PlD có xuất xứ Nhật Bản. Với phương pháp chuyển gen nêu trên, các gen chỉ thị huỳnh quang GFP và DsRed đã được tích hợp thành công vào hệ gen của chủng A. oryzae VS1 và cả hai gen đều biểu hiện mạnh ở cả hệ sợi cũng như trong toàn bộ cuống mang
đang nạp các trang xem trước
