TAILIEUCHUNG - GIẢI TRÌNH TỰ DNA

Dựa trên nguyên tắc dùng enzyme polymerase để tạo sợi bổ sung từ mồi cho sợi khuôn, nhưng do trong ống phản ứng có thêm các ddNTP, nên mỗi khi men polymerase kéo nhầm ddNTP vào thì sợi bổ sung sẽ bị chặn lại và kết quả là sẽ có các sợi bổ sung với độ dài khác nhau. | GIẢI TRÌNH TỰ DNA DNA SEQUENCING TS. BS. Đỗ Thị Thanh Thủy 1. GIẢI TRÌNH TỰ DNA Giải trình tự DNA là một thí nghiệm cho kết quả thứ tự sắp xếp các nucleotide trong đoạn DNA đó. Vd: 5’CGGCTAGCAGTCTCGCGGGGGCACGCCCAAATCTCCAGGCATTGAGCGGGTTTGATCCAAGAAAGGACCCGGTCGTCCTGGCAATTCCGGTGTACTCACCGGTTCCGCAGACCACTATGGCTCTCCCGGGAGGGGGGATCCTGGAGGCTGCACGACACTCATACTAACGCCATGGCTAGACGCTTAATAGAACAANAAA3’ 2. HAI PHƯƠNG PHÁP GIẢI TRÌNH TỰ DNA Phương pháp hoá học giải trình tự DNA của Maxam & Guilbert (1977) Nobel hóa học 1980 (phương pháp giải trình tự) Walter Gilbert Phương pháp enzyme giải trình tự của Frederick Sanger (1977) Nobel hoá học 1958 (cấu trúc protein: Insulin) Nobel hóa học 1980 (phương pháp giải trình tự) . GIẢI TRÌNH TỰ DNA BẰNG PP HÓA HỌC 1. Đánh dấu một đầu của đoạn DNA bằng gốc phospho đồng vị phóng xạ (32P). 2. Xử lý các đoạn DNA đã đánh dấu 32P bằng hóa chất làm biến đổi đặc hiệu một hoặc hai loại base của nucleotide trên đoạn DNA 3. Điện di mẫu DNA đã xử lý trong 4 ống nghiệm này trên 4 hàng của một gel polyacrylamide biến tính Autoradiography Dựa trên nguyên tắc dùng enzyme polymerase để tạo sợi bổ sung từ mồi cho sợi khuôn, nhưng do trong ống phản ứng có thêm các ddNTP, nên mỗi khi men polymerase kéo nhầm ddNTP vào thì sợi bổ sung sẽ bị chặn lại và kết quả là sẽ có các sợi bổ sung với độ dài khác nhau. . GIẢI TRÌNH TỰ DNA BẰNG PP ENZYM ddNTP dNTP Bốn phản ứng polymer hoá xảy ra trong 4 ống riêng biệt Tỉ lệ dNTP và ddNTP = 100 : 1 Mồi được đánh dấu T 3’ C G C A G T C C T A G C T T A G C G G 5’ A C G T Áp gel điện di lên phim (mồi đánh dấu bằng phóng xạ hay bằng hoá quang), các vạch điện di trên gel sẽ hiện trên phim. C G G G C G T Sequence 5’ to 3’ MỒI ĐÁNH DẤU PHÓNG XẠ P35 ĐÁNH DẤU ddNTP Sequence-specific primer Gắn ddNTP ngẫu nhiên, khi xẩy ra, p/ứng ngừng. Vì nhiều copy của DNA đích được tạo đồng thời, nên các sản phẩm DNA được tổng hợp mới của tất cả các kích thước đều hiện diện với tận cùng là các ddNTP GIẢI TRÌNH TỰ BẰNG ĐIỆN DI MAO QUẢN Dùng gel .

• Y học thường thức
• GIẢI TRÌNH TỰ DNA
• bài giảng GIẢI TRÌNH TỰ DNA
• bệnh học đại cương
• giải phẩu học
• phác đồ điều trị
• y cơ sở
• ngoại cơ sở
• Khảo sát biến thể NUDT15
• Bệnh nhân bạch cầu
• Bạch cầu cấp dòng lympho
• Kỹ thuật giải trình tự chuỗi DNA
• Giải trình tự chuỗi DNA
• Giải trình tự vùng HVI
• Giải trình tự vùng HVII
• DNA ty thể người
• Giải trình tự
• Khối lượng và chất lượng
• Luận án Thạc sĩ
• Hệ thống thông tin
• Thuật toán tìm kiếm chuỗi DNA
• Chương trình N Gram
• Tìm kiếm dữ liệu
• PCR giải trình tự
• Giải trình tự bộ gene người
• Phương pháp hóa học giải trình tự DNA
• Ứng dụng công nghệ giải trình tự
• Bài giảng y học
• DNA thai tự do
• Sàng lọc trước sinh không xâm lấn
• Lệch bội nhiễm sắc thể
• Công nghệ giải trình tự bán dẫn
• Tạp chí Công nghệ Sinh học
• Mối Coptotermes gestroi
• Gen mã hóa xylan 1 4 beta xylosidase
• Giải trình tự DNA metagenome
• Trình tự axit amin của enzyme
• Xây dựng Probe
• Gen mã hóa endo 1 4 xylanase
• Dữ liệu giải trình tự DNA metagenome
• Dữ liệu giải trình
• Enzyme mã hóa
• Giải trình tự gen
• Bài giảng Giải trình tự gen
• Ứng dụng chuẩn đoán bệnh
• Giải trình tự bằng sinh tổng hợp
• Qui trình chuẩn đoán gen IX factor
• Biểu hiện gen
• Khu nấm mục trắng thủy phân gỗ
• Quá trình thủy phân cellulose
• Glycoside hydrolase họ 8
• Phân loại trình tự
• Đếm l mer
• Trình tự DNA
• Giải mã trình tự thế hệ mới
• DNA sequence
• Next generation sequencing
• Tạp chí y học
• Nghiên cứu y học
• Đột biến gen KIT
• U mô đệm đường tiêu hóa
• Gastrointestinal stromal tumor
• Hội chứng thực bào máu
• Đột biến gen UNC13D
• Đột biến perforin
• Giải trình tự gen phyA
• Phytase thành thục
• Emzyme phân giải phytic acid
• Tách chiết DNA genome và plasmid
• Gen phyA thành thục từ DNA genome
• Bài viết Bệnh Lebel
• Đột biến DNA ti thể
• Bệnh lý thần kinh
• Thần kinh thị giác
• Kỹ thuật giải trình tự gen
• Rối loạn di truyền ti thể
• Hội chứng MELAS
• DNA ty thể
• Giải trình tự Sanger
• Kỹ thuật PCR RFLP
• Tạp chí nghiên cứu Y học
• Bài viết về y học
• Lệch bội NST giới tính
• Methylation specific PCR
• DNA thai tự do trong máu mẹ
• Kỹ thuật MSP
• Trạng thái methyl hóa vùng promoter gen RASSF1A
• Luận án tiến sĩ
• Luận án tiến sĩ Y học
• Chuyên ngành Hóa sinh
• Giải trình tự gen thế hệ mới
• Bệnh lý ty thể
• Giải trình tự Sanger
• Kỹ thuật giải trình tự Sanger
• Đột biến gen KRAS
• Ung thư đại trực tràng
• Kỹ thuật COLD‐PCR
• Giải trình tự DNA
• Đột biến gen p53
• Carcinôm tuyến đại trực tràng
• Xơ tủy nguyên phát
• Gen CALR
• Đột biến gen
• Sâm Ngọc Linh
• Phương pháp giải trình tự gen
• Tách chiết DNA sâm Ngọc Linh
• Giải trình tự cDNA
• Định loại mẫu sâm Ngọc Linh